探析ERK信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用VIP专享

探析 ERK 信号转导通路在哮喘大鼠气道重塑中的作用 摘要： 目的 讨论在哮喘大鼠气道平滑肌细胞 ASMC 中 ERK 信号转导通路对哮喘气道重塑中的作用。方法 原代培育 ASMC,实验设未干预组、ERK 阻断剂组、PDGF 组、PDGF+ERK 阻断剂组。B 组又分为 B1 组、B2组、B3 组、B4 组,加入浓度分别为μmol/L、1μmol/L、5μmol/L、10μmol/L 的U0126；C 组又分为 C1 组、C2 组、C3 组、C4 组，加入浓度分别为1μg/L、10μg/L、25μg/L、50μg/L 的PDGF-BB。免疫组化法测 ERK1 蛋白的表达(仅测 A、B4、C4、D 组)，RT-PCR 法测其mRNA 表达。结果 ASMC 中 ERK1 蛋白表达 B4组显着低于 A 组，C4 组显着高于 A 组，D 组与 A 组相比差异无统计学意义；B1 组、B2组、B3 组、B4 组 ERK1 mRNA 表达均显着低于 A 组，U0126 以浓度依赖性的方式抑制PDGF-BB 诱导 ASMC 中 ERK 的活化；C1 组、C2 组、C3 组、C4 组 ERK1 mRNA 表达均显着高于 A 组，ERK1 mRNA 的表达与 PDGF－BB存在明显的浓度依赖关系，D 组则与 A 组相比差异无统计学意义。结论 PDGF 可剂量依赖地激活哮喘大鼠 ASMC 内的 ERK 通路，ERK通路参加了 PDGF 诱导的 ASMC 增殖的细胞内信号转导过程。关键词： 哮喘 大鼠 气道重塑 气道平滑肌细胞 气道重塑是支气管哮喘的特征性病理生理改变之一，1992 年哮喘“气道重塑”的概念被明确提出。气道平滑肌细胞(ASMC)增殖在气道重构中占有十分重要的地位,有报道显示哮喘病人气道平滑肌厚度是对比组的 3 倍［1］，故体外气道平滑肌细胞(airway smooth muscle cells,ASMC)培育是讨论哮喘发病机制的重要手段。ERK 信号转导通路广泛存在于多种细胞内,是 MAPK信号通路的 3 个家族成员之一，已发现它在气道平滑肌上广泛分布,主要以ERK1、ERK2 两种亚型存在［2，3］。ERK主要介导生长因子如血小板源性生长因子(PDGF)、碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblastgrowth factor, bFGF)、胰岛素样生长因子(IGF21)等的细胞内信号传导,调节细胞的增殖、分化、迁移等生物学行为。本实验中通过体外培育哮喘大鼠气道平滑肌细胞、PDGF-BB 刺激哮喘大鼠气道平滑肌细胞增殖，以及 ERK 特异性抑制剂U0126 阻断 ERK 通路后,观察 ERK1 蛋白及其mRNA 在哮喘大鼠气道平滑肌细胞内表达情况,探讨 ERK 信号通路对哮喘气道重塑的作用。 1 材料与方法 实验材料 主要试剂：DM...