第六章从杂交育种到基因工程第 2 节基因工程及其应用1．限制性内切酶及其特点在生物体内有一类酶，它们能将外来的 DNA 切断，即能够限制异源 DNA 的侵入并使之失去活力，但对自身的 DNA 却无损害。科学家还注意到，这种酶是从 DNA 分子内部切断 DNA的，因此，这种酶称做限制性内切酶。美国生物学家内森斯和史密斯因发现了限制性内切酶而获得 1978 年度的诺贝尔生理学或医学奖。限制性内切酶通常能识别 4～6 个碱基长度的特定 DNA 序列，并能以特定的模式剪切DNA 链。一般来说，被识别的 DNA 序列是回文序列。这种序列的特点是，当从左右两端分别阅读这段双链 DNA 的碱基序列时，双链上的碱基序列是相同的。按照切割的方式，限制性内切酶可以分为错位切和平切两种，它们分别产生黏性末端和平末端。目前大约已有 500 种限制性内切酶，这些酶的命名方式与 EcoRI 一样遵循统一的规则。第一个字母是分离出此酶的细菌属名的第一个字母，后两个字母为种名的前两个字母，小写，株系数字通常都省略，罗马数字用来表示从同一个细菌中分离出的不同的限制性内切酶。如 HpaI 和 HpaⅡ 就是从同一种细菌中分离出来的第一种和第二种内切酶。几种常用的限制性内切酶及其酶切位点如下表： 几种常用限制性内切酶及其酶切位点限制性内切酶识别位点限制性内切酶识别位点EcoRIXbaIXhoINdeIG↓AATTCT↓CTAGAC↓TCGAGCA↓TATGApaIBgⅡClaISmaIGGGCC↓CA↓GATCTAT↓CGATCCC↓GGG1、 基因工程中的运载体 在基因操作过程中使用运载体有两个目的：一是用它作为运载工具，将目的基因转移到宿主细胞中去；二是利用它在宿主细胞内对目的基因进行大量的复制（称为克隆）。现在所用的运载体主要有两类：一类是细菌细胞质的质粒，它是一种相对分子质量较小、独立于染色体 DNA 之外的环状 DNA（一般有 1～200 kb 左右，kb 为千碱基对），有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。质粒能通过细菌间的接合由一个细菌向另一个细菌转移，可以独立复制，也可整合到细菌染色体 DNA 中，随着染色体 DNA 的复制而复制。另一类运载体是噬菌体或某些病毒等。现在人们还在不断寻找新的运载体，如叶绿体或线粒体 DNA 等也有可能成为运载体。作为运载体必须具有三个条件：在宿主细胞中能保存下来并能大量复制；有多个限制酶切点，而且每种酶的切点最好只有一个，如大肠杆菌 pBR322就有多种限制酶的单一识别位点，可适于多种限制酶切割的 DNA...
