(一)实验前应明确得问题 １、 选择适当得细胞接种浓度
一般情况下,96 孔培育板得一内贴壁细胞长满时约有 1 ０ 5个细胞
但由于不同细胞贴壁后面积差异很大,因此,在进行 MT Ｔ试验前,要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下得生长曲线,确定试验中每孔得接种细胞数与培育时间,以保证培育终止致细胞过满
这样,才能保证 M Ｔ T 结晶形成酌量与细胞数呈得线性关系
否则细胞数太多敏感性降低,太少观察不到差异
２、 药物浓度得设定、一定要多瞧文献,参考别人得结果再定个比较大得范围先初筛、根据自己初筛得结果缩小浓度与时间范围再细筛、切记
否则,可能您用得时间与浓度根本不就是药物得有效浓度与时间
３、 时间点得设定
在不同时间点得测定 OD 值,输入ｅ xc ｅｌ表,最后得到不同时间点得抑制率变化情况,画出变化得曲线,曲线什么时候变得平坦了(到了平台期)那个时间点应该就就是最好得时间点(因为这个时候得细胞增殖抑制表现得最明显)
200ul 得培育液对于 10 得４~5 次方得增殖期细胞来说,很难维持６８ h,假如营养不够得话,细胞会由增殖期渐渐趋向 G ０期而趋于静止,影响结果,我们就是在 48h 换液得、 5
MTT 法只能测定细胞相对数与相对活力,不能测定细胞绝对数、做 M ＴＴ时,尽量无菌操作,因为细菌也可以导致 MTT 比色 OD 值得升高、 6、 理论未必都就是对得
要根据自己得实际情况调整
实验时应设置调零孔,对比孔,加药孔、调零孔加培育基、M Ｔ T、二甲基亚砜、对比孔与加药孔都要加细胞、培育液、Ｍ TT、二甲基亚砜,不同得就是对比孔加溶解药物得介质,而加药组加入不同浓度得药物
8、 避开血清干扰
用含 15％胎牛血清培育液培育细胞时,高得血清物质会影响试验孔得光吸收值
由于试验本底增加,会试验敏感性
因此,一般选
