第一章基因工程概述 1、什么就是基因工程,基因工程得基本流程？基因工程(Genetic engineering)原称遗传工程。从狭义上讲,基因工程就是指将一种或多种生物体(供体)得基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之根据人们得意愿遗传并表达出新得性状。因此,供体、受体与载体称为基因工程得三大要素。1、分离目得基因 2、限制酶切目得基因与载体3、目得基因与载体 DNA 在体外连接 4、将重组 DNA 分子转入合适得宿主细胞,进行扩增培育 5、选择、筛选含目得基因得克隆6、培育、观察目得基因得表达第二章基因工程得载体与工具酶 1、 基因工程载体必须满足哪些基本条件？具有对受体细胞得可转移性或亲与性。具有与特定受体细胞相适应得复制位点或整合位点。具有多种单一得核酸内切酶识别切割位点。具有合适得筛选标记。分子量小,拷贝数多。具有安全性。2、 质粒载体有什么特征,有哪些主要类型？1、自主复制性2、可扩增性3、可转移性4、不相容性 主要类型有 1、克隆质粒 2、测序质粒 3、整合质粒 4、穿梭质粒 5、探针质粒 6、表达质粒3、 质粒得构建(1)删除不必要得 DNA 区域,尽量缩小质粒得分子量,以提高外源 DNA 片段得装载量。一般来说,大于 20Kb 得质粒很难导入受体细胞,而且极不稳定。(2)灭活某些质粒得编码基因,如促进质粒在细菌种间转移得 mob 基因,杜绝重组质粒扩散污染环境,保证 DNA 重组实验得安全,同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应得基因,提高质粒得拷贝数(3)加入易于识别得选择标记基因,最好就是双重或多重标记,便于检测含有重组质粒得受体细胞。(4)在选择性标记基因内引入具有多种限制性内切酶识别及切割位点得 DNA 序列,即 多克隆接头(Polylinker),便于多种外源基因得重组,同时删除重复得酶切位点,使其单一化,以便环状质粒分子经酶处理后,只在一处断裂,保证外源基因得准确插入。(5)根据外源基因克隆得不同要求,分别加装特别得基因表达调控元件。4、 什么就是人工染色体载体？将细菌接合因子、酵母或人类染色体上得复制区、分配区、稳定区与质粒组装在一起,即可构成染色体载体5、 什么就是穿梭载体？人工构建得、具有两种不同复制起点与选择标记、可以在两种不同得寄主细胞中存活与复制得载体。6、入-噬菌体载体及构建l-DNA 为线状双链 DNA 分子,长度为 48、5kb,在分子两端各有 12 个碱基得单链互补粘性末端。1 缩短长度提高外源 DNA 片段得有效装载量删...
