第一章基因工程概述 1、什么就是基因工程,基因工程得基本流程
基因工程(Genetic engineering)原称遗传工程
从狭义上讲,基因工程就是指将一种或多种生物体(供体)得基因与载体在体外进行拼接重组,然后转入另一种生物体(受体)内,使之根据人们得意愿遗传并表达出新得性状
因此,供体、受体与载体称为基因工程得三大要素
1、分离目得基因 2、限制酶切目得基因与载体3、目得基因与载体 DNA 在体外连接 4、将重组 DNA 分子转入合适得宿主细胞,进行扩增培育 5、选择、筛选含目得基因得克隆6、培育、观察目得基因得表达第二章基因工程得载体与工具酶 1、 基因工程载体必须满足哪些基本条件
具有对受体细胞得可转移性或亲与性
具有与特定受体细胞相适应得复制位点或整合位点
具有多种单一得核酸内切酶识别切割位点
具有合适得筛选标记
分子量小,拷贝数多
具有安全性
2、 质粒载体有什么特征,有哪些主要类型
1、自主复制性2、可扩增性3、可转移性4、不相容性 主要类型有 1、克隆质粒 2、测序质粒 3、整合质粒 4、穿梭质粒 5、探针质粒 6、表达质粒3、 质粒得构建(1)删除不必要得 DNA 区域,尽量缩小质粒得分子量,以提高外源 DNA 片段得装载量
一般来说,大于 20Kb 得质粒很难导入受体细胞,而且极不稳定
(2)灭活某些质粒得编码基因,如促进质粒在细菌种间转移得 mob 基因,杜绝重组质粒扩散污染环境,保证 DNA 重组实验得安全,同时灭活那些对质粒复制产生负调控效应得基因,提高质粒得拷贝数(3)加入易于识别得选择标记基因,最好就是双重或多重标记,便于检测含有重组质粒得受体细胞
(4)在选择性标记基因内引入具有多种限制性内切酶识别及切割位点得 DNA 序列,即 多克隆接头(Polylinker),便于多种外源基因得重组,同时删除重复得酶切位点,使其单一化,以便
