免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大得难处就是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理,每一步知道为什么这样做,这样您才敢大胆地改革先前得不对得方法步骤。如抗体孵育条件主要就是抗体浓度、温度、时间,这三者一般就是相互成反比得（相对)，其中浓度就是最重要得先决条件,温度决定反应得速度、时间决定反应得量。就拿温度来说,可以有 4 度、室温、37 度,我推举 4 度最佳,反应最温与,背景较浅；而 3 ７度反应速度较快，时间较短;室温我不太提倡,除非您每次都把环境温度控制在一定得范围,否则,尽量选择前两者。 ２、免疫组化最大得优势就是定位与定性。相比于其她蛋白检测方法,免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，就是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子得转位讨论十分有用。 3、免疫组化结果定量分析得前提就是高质量得染色切片.免疫组化结果也能定量分析,但必须就是背景染色浅而特异性染色较深得情况下，分析最为准确,这种原则可能也就是我们日常审稿时判定讨论结果得必备条件。 ４、免疫组化实验一定要设置阳性对比与阴性对比。阳性对比一般就是用肯定表达这种抗原得切片来做；阴性对比一般就是用 PBS 或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者就是排除方法与实验系统有无问题;后者就是排除有无一抗外得非特异性染色。 ５、免疫组化得应用广泛,就是当前实验讨论得最重要方法之一。如今发Ｓ CI 论文时,明显感觉仅靠量化得数据来发文章很难,加一些形态学数据或图片,老外十分欢迎，可能就是怕您学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否得鉴定标准就是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良得染色切片。我在平常带教中就发现许多讨论生把我已经摸索很成熟得反应条件、浓度、方法步骤,重复运用于同一性质得切片与同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法,更换一种抗体后,居然连二抗得种属来源都拿错了。失败往往促进您去思考试验原理与过程，成功有时也加快您自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今日敢在这里说这说那,这就是因为我经过了反复得动手+动脑,把理论原理运用于实践，在把实践中发现得问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯穿. ﻫ一、概念与常用方法介绍 ﻫ 1、定义用标记得特异性抗体对组织切片或细胞标本...
