”基因工程与蛋白质工程”知识归纳及试题例析一、 知识归纳1．与 DNA 分子相关的酶名称作用参加的生理过程应用限制性核酸内切酶切割某种特定的脱氧核苷酸序列 基因工程DNA 连接酶连接两个 DNA 片段基因工程DNA 聚合酶在脱氧核苷酸链上添加单个脱氧酸DNA 复制RNA 聚合酶在核苷酸链上添加单个核糖核苷酸转录解旋酶使碱基间氢键断裂DNA 复制及转录逆转录酶以 RNA 为模板合成 DNA逆转录及基因工程特别注意: ( 1) 限制性核酸内切酶的来源: 多数来自原核生物; 作用特点: 主要切割外源 DNA, 对自身的 DNA 不起作用从而达到保护自身的目的; 作用结果: 形成 DNA 片断末端。( 2) 各种酶都具有专一性, 特别是限制酶只能识别特定的脱氧核苷酸序列, 并在特定的碱基之间切开。2．基因工程的基本操作程序( 1) 猎取目的基因① 基因文库: 是将含有某种生物不同基因的许多 DNA 片段, 导入受体菌的群体中经过克隆而储存, 各个受体菌分别含有这种生物的不同基因。② 基因组文库: 基因文库中含有一种生物所有的基因就叫做基因组文库。③ 部分基因文库: 含有一种生物的部分基因, 就叫做部分基因文库, 如 cDNA 文库。PCR 技术与 DNA 复制的比较比较项目PCR 技术DNA 复制相同点原理DNA 双链复制( ( 碱基互补配对) 原料四种游离的脱氧核苷酸条件模板、 ATP、 酶等不同点解旋方式DNA 在高温下变性解旋解旋酶催化场所体外复制主要在细胞核内酶热稳定的 DNA 聚合酶( Taq 酶) 细胞内含有的 DNA 聚合酶结果在短时间内形成大量的 DNA 片段形成整个 DNA 分子( 2) 基因表示载体的构建( 基因工程的核心) ① 构建目的: 使目的基因在受体细胞中稳定存在, 而且能够遗传给下一代, 同时, 使目的基因能够表示和发挥作用。② 一个基因表示载体的组成: 目的基因、 启动子、 终止子、 标记基因等。③ 构建方法( 3) 将目的基因导入受体细胞—转化生物种类植物细胞动物细胞微生物细胞常见方法农杆菌转化法显微注射技术Ca2+处理法受体细胞体细胞受精卵原核细胞转化过程将目的基因插入 Ti 质粒的 T-DNA 上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞的DNA→表示将含有目的基因的表示载体提纯→取卵( 受精卵) →显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表示载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA 分子特别注意: 受体细胞中常见植物受精卵或体细胞( 经组织培育...
