欧鳗嗜水气单胞菌病的研究

欧鳗嗜水气单胞菌病的讨论近年来，欧鳗的大规模集约化养殖已在我国日益增多。但是，随着养殖规模的扩大，养殖密度的不断提高，各种影响欧鳗成活率的问题也日渐增多，而由嗜水气单胞菌作为病原的欧鳗暴发性传染病则是其中一个突出问题。本文对嗜水气单胞菌的生理生化特性、致病因子、致病条件等作了一系列的初步讨论，旨在为欧鳗暴发性传染病的防治提供有力的理论依据，更好地推动欧鳗养殖业向着更强、更快、更健康的方向进展。一、材料与方法1.病原菌的分离采纳普通蛋白琼脂培育基，其成份为胰蛋白胨 10g，酵母膏 10g，氯化钠 5g，琼脂 18～20g，pH7.2～7.4，15 磅 20 分钟灭菌备用。取患典型病症的鳗鱼，以无菌解剖刀将溃烂表层切开，以接种环迅速挑取少许病灶深层粘液，进行琼脂平板划线分离。28℃，24 小时常规培育后，出现一些形态基本一致的菌落。挑取单菌落，进行纯培育，然后转接斜面备用。2.致病性实验将实验菌种接斜面，28℃培育约 24 小时，每个斜面中加入无菌生理盐水 5～10mL，制成浓厚菌悬液。取 1mL 菌悬液，以活菌平板计数法测定细菌数，吸取0.1mL 菌悬液，注入健康鳗鲡腹腔中（注射前已置水族箱中观察 5 天），同时设对比，置 24～28℃水族箱中观察其症状。3.病原菌的形态观察和生理生化实验采纳致病力较强的菌株 Ah3、Ah26、Ah38 在 28℃条件下，经 24 小时培育，进行革兰氏染色，鞭毛染色，观察其形态及其它生理生化实验。4.血清型讨论1）采纳小白兔（从市场上购买）制备抗血清。攻毒用健康鳗鱼（由养鳗场提供），规格为 40～50g 左右，试验前观察 5～7 天证实健康无病。2）将具有强致病力的 Ah3、Ah26、Ah38 等菌株分别于营养琼脂上培育 24 小时，刮取菌苔，用无菌生理盐水冲洗菌体三次，将菌体分别用 0.35%福尔马林灭活25 小时，制得全菌抗原（WC 抗原），4℃冰箱保存备用；3）以 0.35%福尔马林灭活体 0.1mL（浓度为 1×10E9cell/mL）加等量弗氏完全佐剂混合均匀，皮下多点免疫白兔，以后每隔一周耳静脉加强免疫，并逐次加大抗原剂量，获满意效价后颈动脉放血取血清。4）试管凝聚法：免抗血清（1∶60）稀释 0.25mL，加入 0.25mL 浓度为 15R/mL抗原，充分摇匀，4℃，12 小时，观察其凝聚反应。5.嗜水气单胞菌毒力（LD50）测定Ah 菌株接种营养肉汤，28℃培育 24 小时，测菌浓度，用无菌生理盐水 10 倍系列稀释菌体，腹腔注射健康鳗鲡，实验水温 25℃，记录死鱼数及注射菌量，按R...