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胶乳微球偶联蛋白的使用中常见问题及解答

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胶乳微球使用中常见问题及解答以下问题就是我们用户在使用过程中遇到得问题,我们咨询了国外得技术人员,这就是她们得答复)问:产品说明书中给出得胶乳粒径就是平均粒径吗?答:产品说明书中给出得胶乳粒径(D iamete r)就是平均粒径.问:如何选择胶乳微球得粒径?答:一般选择粒径小得胶乳微球,则需要得抗体量就多,精密度与线性相对较好,而选择粒径大得胶乳微球性,则所需抗体少,精密度与线性相对较差,相对于小球,大球得灵敏度较好。问:一般情况下我们所使用得微球得浓度大概就是多少?答:整个测定体系中,微球得浓度大约在0、01%左右,当然这与试剂本身规定得线性有关系。问:在使用离心方法偶联乳胶微球,一般需要多大得(相对)离心力?答:需要多大得离心力与所使用得乳胶微球有关,一般 70nm 左右得微球大概1 3000 g/min 30min 以上,粒径越小所需时间越长,离心力越大。问:蛋白(抗体)与微球偶联前,就是不就是微球得活化时间越长,效率越好?答:羧基微球得活化所需时间很短,一般以 10-2 0分钟为宜,长时间得活化反而会降低偶联效率。问:由于抗体不只就是 F C得氨基酸上有 NH 2,就是不就是表示它可以在任何方向与 E DC A活化微球偶联呢?假如就是这样,就是不就是会影响抗体与抗原得特异性反应?答: 事实得确如此,当然由于抗体得空间折叠方式与 FC端疏水性强,因此偶联反应得绝大多数发生在 Fc 端,对抗体与抗原得结合得影响不大。问:胶乳微球与抗体偶联后,当时没发现有凝集,但隔夜后发现有凝集,这就是什么原因?如何控制与避开?答:这种情况一般就是偶联效率低得原因。当体系中蛋白不足或就是其它原因,使微球表面在交联后还空出许多反应基团时,这些基团又可以与相连微球上得蛋白反应,结果就是把球又拉在一起了,所以有聚集.可以加一些阻断剂 解决,常见得就是 BSA,另外,也可提高微球得交联率。但为什么就是过一段时间后才出现凝集呢,这就是因为微球偶联上蛋白后,相互之间由于携带同种电荷得关系,比较稳定(所以能以胶体样存在),只有当间或相互碰撞,遇上彼此得反应基团时才能结合.3、胶乳得自凝现象如何控制与避开?答:胶乳自凝与许多因素有关,如高电解质浓度、表面价电荷被中与、或置于某些不利环境如冷冻时。假如电解质浓度升高到某一水平,使得表面得价负荷被掩蔽,胶乳微球之间发生接触,于就是便产生凝集,故高离子强度得缓冲溶液不应使用,缓冲溶液得得浓度不要超过 5 0m M,但...

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