Dellaporta法小量快速提取植物全基因组DNA

Dellaporta 法小量快速提取植物全基因组 DNA前言该方法为 QIAGEN 的 DNA 提取试剂盒所采纳，所以获得的 DNA 产量较低但质量相对于 CTAB 及 Quick 法高。推举不喜爱 CTAB 法耗时耗力或无法保证Quick 法结果的同学使用。该方法所得 DNA 可直接用于 T-DNA 的 Genotyping及点突变的 CAPS 或 dCAPS，若要用于 ALM-PCR 克隆未知基因，建议做步骤7（由于实验室现已使用 Tiangen 的 DNA 提取试剂盒，因此该方法不再建议用于克隆）。参考 cold spring harbor protocols: Dellaporta Miniprep for Plant DNA Isolation原文地址: http://cshprotocols.cshlp.org/content/2025/3/pdb.prot5178.abstract材料与试剂试剂：Tris-HCl、EDTA-Na2、NaCl、SDS、醋酸钾、醋酸钠。1 提取缓冲液名称终浓度Tris-HCl（pH8.0）100mMEDTA-Na250mMNaCl50mMTris-HCl 及 EDTA-Na2通常配成 1M、0.5M 的母液，配置时稀释即可，100mL 配制。2 BTE buffer名称终浓度Tris-HCl（pH8.0）50mMEDTA-Na21mM3 20%（w/v）SDS：20g SDS 加水定容至 100mL4 5M 醋酸钾：49.07g 醋酸钾加水定容至 100mL5 3M 醋酸钠（pH5.2）：40.83g NaAc·3H2O 溶解于 80mL ddH2O 中，加冰醋酸至 pH5.2，定容至 100mL方法步骤1 取适当植物植物材料，液氮研磨至粉末状。2 加入 500μl 提取缓冲液，放置于冰上。3 加入 35μl 20% SDS，涡旋振荡混匀，65-70ºC 水浴 10min。4 加入 130μl 5M 醋酸钾，摇动混匀，冰浴 5min。5 20000g 离心 3min，EP 管旋转 180º 后再离心 3min；离心期间，准备新的 EP管并加入 640μl 异丙醇及 60μl 3M 醋酸钠备用。6 离心完成后转移上清至准备好的离心管中，轻摇混匀；20000g 离心 5min，弃上清。7 选作：加入 200μl BTE 缓冲液，重悬 DNA 沉淀；20000g 离心 3min，弃上清。8 加入 700μl 70%乙醇，洗涤两次，室温干燥。9 加水 50 或 100μl 溶解 DNA。附录或说明1 步骤 1 中液氮研磨（枪头捣碎）可换用小杵在提取缓冲液中将叶片研碎，会更省时省力。2 步骤 4 的冰浴时间要求不严格，即便省去亦可（DNA 产量有所减少）。3 步骤 5 中 EP 管旋转 180º 旋转是为了让沉淀聚于管底，方便吸取上清；不旋转亦可但适度延长离心时间。4 各步骤中的离心时间要求并不严格，通常 3min 足够将残渣（步骤 5）或DNA（步骤 6）沉淀。5 步骤 8 中洗涤一次亦可，但须保证晾干残余乙醇（乙醇会影响后续实验中），建议加入 70%乙醇洗涤后放置一小会使 DNA 沉至管底，轻轻倒掉大部分乙醇，通常管底的大约 100μl 不会被倒出，然后离心将管壁上的残液离下，用黄色枪头吸去即可。6 步骤 9 中加水量根据自身情况确定，通常加水 50μl 时使用 1-2μl 做模板进行PCR 或 100μl 时使用 3-4μl。