HSP60/HSP75 作为急性缺血性脑卒中缺血半暗带血清标志物的动物实验讨论目的:筛选急性缺血性脑卒中缺血半暗带(Ischemic penumbra,IP)和血清(Serum,SE)中热休克蛋白 60(Heat shock protein,HSP60)、热休克蛋白75(Heat shock protein,HSP75)并验证其可否作为急性缺血性脑卒中 IP 的 SE特异性蛋白质标志物。方法:选取成年雄性 SD 大鼠 30 只,用线栓法制备大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,行神经功能评分、HE 染色法确证脑缺血。将大鼠随机分为 5 组(每组 6 只);0 小时(h)为假手术组,缺血1h、2h、3h、4h 为造模组。通过之前预实验筛选出 IP、SE 表达变化趋势一致的蛋白质,生物信息学分析候选蛋白;初步确定 HSP60/HSP75 为 IP 的 SE 特异性蛋白标志物;行 Western blot(WB)验证标志物,分析 HSP60、HSP75 在 IP 和 SE 中的表达及随时间变化的趋势。结果:IP 解剖层面行切片作 HE 染色,光学显微镜下显示相应正常组织、IP和梗死核心(Ischemic core,IC)特征性表现,IP 区域显示少量神经元轻度水肿,少部分细胞核深染,凋亡较少,而 IC 区大量神经元核深染、固缩和溶解,说明我们的实验取材正确。与假手术组及 IC 相比,造模组各时间点 HSP60/HSP75 在 IP的表达量显著增高(P<0.05)。检测造模组各时间点 HSP60/HSP75 在 IP 和 SE 中的表达,结果发现 HSP60 在IP 及 SE 中的表达均较假手术组明显增高(P<0.05),而 HSP75 的蛋白含量在造模组 IP 中表达虽较假手术组明显增高(P<0.05),但在 SE 中的表达与假手术组比较差异无统计学意义。双变量分析,HSP60 或 HSP75 的表达变化在 IP 与 SE之间无显著相关性(P>0.05)。结论:HSP60、HSP75 在 MCAO 模型超急性期缺血性卒中 HAIS(Hyperacute ischemic stroke)的 IP 区特异性表达,但尚不能证实二者或其一可作为 HAIS IP的 SE 特异性标志物。
