Mm9-circ-010056对糖尿病诱导血管内皮间质转化的影响及其机制研究

Mm9_circ_010056 对糖尿病诱导血管内皮间质转化的影响及其机制讨论目的：观察 mm9_circ₀10056 在糖尿病诱导的主动脉内皮间质转化（endothelial to mesenchymal transition,EndoMT）中的作用,并探讨其可能的分子机制。方法：采纳核糖核酸酶 RNase R 处理总 RNA 来检测 mm9_circ₀10056 的成环性;采纳荧光原位杂交技术（fluorescence in situhybridization,FISH）检测其细胞内定位。取自发性 II 型糖尿病模型 db/db 小鼠（8 周龄,12 周龄,n=9）和野生型（wild type,WT）小鼠（8 周龄,12 周龄,n=9）胸主动脉,检测胸主动脉内皮层mm9_circ₀10056 表达并观察 EndoMT 的发生。培育小鼠主动脉内皮细胞（mouse aortic endothelial cells,MAEC）,采纳晚期糖基化终末产物（advanced glycation end products,AGEs）（0,50μg/ml,100μg/ml,200μg/ml）分别处理 4h,24h,48h,观察其对mm_circ₀10056 表达水平的影响;采纳腺病毒介导mm9_circ₀10056 过表达和 siRNA 干扰 mm9_circ₀10056 表达,观察 mm9_circ₀10056对 AGEs 诱导 MAEC 细胞发生 EndoMT 的调控作用。采纳慢病毒介导的 MAEC 中 Ube3a 过表达,观察 Ube3a 对 AGEs 诱导的 EndoMT的调控作用。采纳免疫荧光共定位和 Western blot 检测 CD31 和 α-SMA 的蛋白表达来评价 EndoMT 的发生,采纳 RT-qPCR 检测 mm9_circ₀10056 和 Ube3a mRNA 水平,采纳 Western blot 检测 Ube3a 蛋白水平。结果：mm9_circ₀10056 来源于 Ube3a 基因,表达稳定不易被核糖核酸酶降解,在细胞浆和细胞核均有表达。与 WT 组小鼠相比,不同周龄 db/db 组小鼠胸主动脉内皮层 mm9_circ₀10056 均表达下调,且观察到了 EndoMT 的发生。在培育的 MAEC 细胞中,AGEs 呈浓度依赖性和时间依赖性抑制 mm9_circ₀10056 的表达;mm9_circ₀10056 过表达可以抑制 AGEs 诱导的内皮细胞标志物 CD31 的下调及间充质细胞标志物 α-SMA 的上调,而干扰 mm9_circ₀10056 表达能诱导 EndoMT的发生。过表达或干扰 mm9_circ₀10056 可以调节 MAEC细胞中 Ube3a 的表达;Ube3a 在糖尿病小鼠主动脉内皮层和 AGEs 诱导的 MAEC 细胞中均表达下调,而过表达 Ube3a 可以抑制 AGEs 诱导的 EndoMT 的发生。结论：mm9_circ₀10056 参加了糖尿病诱导的主动脉内皮细胞的 EndoMT 过程,其作用机制可能与 mm9_circ₀10056/Ube3a 途径相关。