PI3K信号通路调控结节病中Treg稳态的机制研究

PI3K 信号通路调控结节病中 Treg 稳态的机制讨论结节病是一种以非干酪样肉芽肿为主要特征,与 Th1/Treg(Regulatory T cell)细胞免疫紊乱紧密相关的全身性多器官肉芽肿疾病,90%以上的结节病患者会累及肺部,因此也被称为肺结节病。肺结节病目前尚无针对发病机制的有效治疗手段。第一部分:白介素 33 改善肺结节病中 Treg 细胞紊乱的讨论肺结节病患者支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)和外周血中 Treg 细胞水平异常且功能缺陷。我们对肺结节病小鼠模型施用白介素33(Interleukin33,IL33)或抗白介素 23(Interleukin23,IL23)抗体进行干预,通过流式细胞术(FACS)分析或实时定量 PCR(qPCR)检测 Th1/T helper 17 cell(Th17)/Tregs 的平衡情况,以及 Treg 细胞免疫调节能力的变化,以此讨论IL33 或抗 IL23 抗体对肺结节病免疫紊乱的调节和对 Treg 细胞群稳态的影响。同时通过蛋白质印迹(Western Blot)检测 PI3K/Akt 和 TGF-β/Smad2/Smad3信号通路中关键蛋白的表达,寻找此过程中可能发挥作用的关键信号通路。结果表明,IL33 可以促进肺结节病小鼠模型 Th1/Th17/Tregs 的再平衡,增强结节病中受到损伤的 Treg 细胞的免疫调节能力。而 IL33 的调节作用可能是通过促进 Treg 细胞表面 ST2(IL33 受体)的过表达来实现的。此外,IL33 促进肺结节病中 Th1/Th17/Tregs 再平衡的同时,有效地抑制了在结节病中异常活化的 PI3K 信号通路。结果提示:IL33 可能通过抑制 P13K 信号通路,恢复肺结节病中 Tregs 稳态,再平衡 Th1/Th2,发挥抗炎作用。PI3K 信号通路可能对结节病中 Treg 细胞的稳态调节起到重要作用,因此设计了后续实验,对 PI3K 通路与结节病中 Treg 细胞之间调控关系进行进一步讨论。第二部分:调控 PI3K 信号通路对肺结节病 Treg 细胞紊乱的讨论 PI3K/Akt信号通路对于维持 Treg 的体内平衡至关重要。活动期结节病患者 PI3K/Akt 信号通路异常激活。结合前期数据,我们选用了两种 PI3K 抑制剂(LY294002 和 BKM120),来调控PI3K 信号通路,以调节结节病中 Treg 细胞水平和功能。采纳 FACS、qPCR 和MACS 免疫磁珠分选 CD4+CD25+T 细胞以检测其抑制功能等方法,检测 PI3K 抑制剂对结节病小鼠模型 Th1/Th2、Treg/Th17 细胞亚群紊乱的调节作用以及对 Treg细胞增殖、分化和功能的影响。结果显示,在肺结节病模型小鼠的 Treg 细胞群中存在着 PI3K/Akt 信号通路的异常活化...