植物原生质体的分离及融合生 72 伍国羽 2025012357实验时间：2025 年 10 月 30 日 星期六一、实验目的1.学习植物原生质体的分离制备技术，观察原生质体形态。2.学习植物原生质体的融合技术，观察融合原生质体时其形态及变化。二、实验原理原生质体融合(protoplast fusion)是指将两种不同的细胞经溶菌酶或青霉素等处理，失去细胞壁成为原生质体后进行相互融合的过程。 在融合前要用纤维素酶和果胶酶除去植物体的细胞壁,获得有活性的原生质体,用电激、振动、PEG 等方法将原生质体融合，在融合过程中，细胞核也会融合，融合后的细胞比平常细胞大一些。表现出两种植物体的优良性状。高 pH--高 Ca2+法和聚乙二醇(PEG)法。高 pH--高 Ca2+法诱导原生质体融合的基本原理是中和原生质体表面所带的电荷,使原生质体的质膜紧密接触,从而有利于质膜的接触融合.PEG 处理原生质体可以使原生质体聚集促进融合.电融合法。先将两种原生质体以适当比例混合成悬浮液,将其滴入电融合小室中,给小室两极以交变电流,使原生质体沿电场方向排列成串珠状,接着给以瞬间高压强度的电脉冲,使原生质体膜产生局部破损而导致融合.病毒融合。副粘病毒科的病毒，如副流感病毒(Sendai virus)和新城鸡瘟病毒，在其被膜中目前发现了两种糖蛋白。较大的一种具有粘附细胞和凝血的作用；较小的一种可介导病毒同宿主细胞融合, 也可诱导细胞与细胞融合，称为融合蛋白(fusion protein)。人工利用病毒诱导细胞融合即是利用病毒的这一特性, 使用时先用紫外线将病毒灭活, 稀释到一定浓度加入到细胞悬液中, 诱导细胞融合。三、实验用品显微镜、擦镜纸、剪子、镊子、小平皿、吸管、直式漏斗、300 目尼龙网、10ml 离心管、载玻片、盖玻片。四、试剂1.洗涤液：甘露醇0.6MCaCl2·2H2O8mMNaH2PO4·H2O2mMpH=5.62.酶混合液：纤维素酶1% 果胶酶0.5-0.7% 甘露醇0.6M CaCl2·2H2O8mM NaH2PO4·H2O7mM MES3mM pH=5.63.PEG 溶液：PEG-600040% CaCl2·2H2O3.5mMKH2PO4·H2O0.7mM 葡萄糖0.3mM pH=5.84.高 Ca，高 pH 洗涤液： CaCl2·2H2O100mM Tris50mM 山梨醇100mM pH=10.55.蔗糖溶液：20%五、实验步骤：1.原生体的制备1)将新奇花瓣（两红一粉）用蒸馏水洗洁净，用滤纸吸干表面水分。2)用尖头镊剥花瓣的下表皮，加入几滴酶液中恒温 27℃振荡半小时。3)酶解好的原生质体混合液经 300 目尼龙网过滤到 10ml 离心管，加入少量洗涤液定容至 4ml，此时，未被酶解的大...
