病毒（TuMV）接种及其后续管理1 病毒接种1.1 浸润接种——侵染性克隆（1）浸润选择健康无胁迫植株，如发生难以浸润现象，应弃置不用。（2）浸润前将需要的农杆菌菌株在平板上活化，平板继代培育 2 次，液体培育基可多次继代培育，活化之后的农杆菌在 1 周之内使用。（3）农杆菌以平板形式保存不超过 1 月，平板继代不超过 2 次。（4）-80℃保存时应注意采纳高浓度（10×）保存，以甘油：液体培育基保存。（5）选取对应 PDS 指示的完全白化的两片叶子（一般为第 3、4 片），进行浸润接毒。一般以接毒 2 片叶子为宜。应完全浸润，不宜用注射器在同一片叶上注射次数过多，一般 2次为宜，以防浸润叶坏死。1.2 摩擦接种（1）摩擦接种一般在 VIGS 后 7-12 天左右，PDS 至少有 3-4 片叶子完全白化。（2）摘取感病植株叶片（最好是系统叶），置于研钵，滴加少许 PBS，研磨成均匀液体。（3）选取对应 PDS 指示的完全白化的两片叶子（一般为第 3、4 片），洒少许金刚砂，进行摩擦接毒。一般以接毒 2 片叶子为宜。金刚砂不宜洒过多，也可将金刚砂洒于植物汁液，不时搅拌。（4）摩擦接毒时，尽量保持摩擦力度、摩擦次数一致。可用海绵、棉签、徒手摩擦接种。（5）摩擦接毒完毕后，应用少量水喷洒于接种叶，以除去多余金刚砂和接种汁液，保证后续照片摄制质量。2 接种（TuMV）时间表播种→10 天后→移栽→3 周左右后→VIGS→7-12 天后→观察、拍照→接毒→2-7 天→观察、拍照→留苗观察一周3 接种前后观察与拍照3.1 接种前：VIGS 后，接种前，观察并拍照 VIGS 表型。（1）在白色荧光灯下，选取典型的 2-3 株植株，将 gus 与实验组放置一起，加上标尺，拍摄俯视照片，并记录表型。（2）若实验组有明显株高差异，可拍摄正视照片，并记录表型。（3）若有生长表型，可在白色荧光灯下，用微距镜头拍摄系统叶等细节。3.2 病毒上接种叶后：约 2-3 天后观察接种叶病毒。（1）可在接种后 48h、60h、72h、84h 等对接种叶进行观察，记录表型。（2）选取某一个典型时刻，拍摄紫外灯下接种叶、白光下整株、白光下接种叶。3.3 病毒上系统叶后：约 3-6 天后观察系统叶病毒。（1）可在接种后 3-6 天，每天早上、下午、晚上对系统叶进行观察，记录表型。（2）选取某一个典型时刻，每天拍摄紫外灯下系统叶、白光下系统叶症状。4 拍摄技巧4.1 细节选取微距镜头，整株选取短镜头。4.2 可选择 M 模式，固定光圈大小（7....
