中山大学人类X染色质标本的制备与观察报告VIP专享

人类 X 染色质标本的制备与观察张皓予 15335203一、实验目的 1。掌握人体口腔黏膜上皮细胞制备的方法。2。正确识别巴氏小体的特征及其所在位置.3。说明人体细胞中核内 X 染色体的数目和性染色体数目之间存在的关系。二、实验原理 X 染色质呈现于女性体细胞间期细胞核内。在口腔黏膜细胞、羊水脱落细胞、皮肤结缔组织等细胞中均可检出.用苯酚品红改良染液染色后，便可观察到染色较浓，多位于核膜内侧缘，呈凸平形、卵圆形、扁平或三角形，直径约 1μm 大小的小体。女性细胞核中出现率为 40％~60％.Barr 和 Bertram 首先（1949）在雌性猫的神经细胞核中发现,在多数核中部有一个小的深染的小体，而在雄性猫的同样细胞中只能偶而观察到这种小体，此后许多人的讨论指出这种与性别有关的两型现象在有袋类、偶蹄类、食肉类和灵长类等动物的多数组织细胞中存在，而在噬齿类中只在少数组织中可以观察到。这种染色质小体现在称为“性染色质”（sex chromatin），或称为“巴氏小体"(Barr body）。这种小体常位于核膜的内表面，呈 Feulgen 阳性反应，表明是 DNA 的成分，有证据表明,性染色质的存在是由于在雌性哺乳动物核中存在两个 X 染色体,其中一个 X 染色体处于失活状态。雄性个体只有一个X 染色体。因此原则上男性不应有性染色质。但假如一个男人有 XXY 染色体，那就会有一个性染色质，虽然表现为男性。同样，XXX 的三体应当有两个巴氏小体。因此,性染色质实质上是一个失活的 X 染色体。为什么失活的 X 染色体会以巴氏小体的形式显示出来?目前，已有许多证据证明，在雌性个体中那根失活的 X 染色体已经异染质化,成为功能性异染质。使用放射自显影的方法已经证明，失活的 X 染色体的固缩周期与其它染色体是不同步的,它在 S 期是晚复制的。此外，人们也已发现，晚复制的这根 X 染色体常位于核的边缘，这个位置也正好是巴氏小体出现的位置。三、实验仪器与试剂 1.仪器与用具显微镜，水浴锅，牙签，载玻片，盖玻片，镊子，吸水纸。2。试剂95%乙醇，1mol/L 盐酸，改良苯酚品红染色液四、实验材料男性和女性人体口腔黏膜细胞。五、实验步骤 1。受检者用水漱口，用牙签刮取受检者口腔颊部黏膜，把第一次刮取物弃去，然后再次用牙签刮取黏膜,将第二次刮取物均匀涂布到洁净的载玻片上，晾干。2。将涂片放入 95%的乙醇中固定 20min,取出晾干。3.将涂片放入 1M HCl 中 37 摄氏度下水解 20min,取出后自来水缓缓冲...