第 2 节 细胞的分化、衰老和凋亡细胞凋亡分子生物学原理 也称为“固缩坏死”、“程序性细胞死亡”或“细胞自杀”，是由基因介导的一系列变化，细胞依靠它来主动地引起它自身的破坏。正常起消除老化细胞或未参与免疫反应的淋巴细胞的凋亡过程，如发生病理性干扰，可对肿瘤生成起作用。凋亡最初由特征性的形态变化来确定，包括：DNA 的程序性降解、染色质浓缩、细胞缩小和碎裂。它可以是生理性的，或由化疗药物及放射诱发（来自希腊文，apoptosis,描写深秋枯叶从涂写上掉落的现象）。 是一种细胞受环境刺激后，在基因调控之下所产生的自然死亡现象，在这一机制下，失去作用或已经受损的细胞会自我毁灭。细胞发生变异的癌细胞就是因为关闭了细胞内线粒体的这一调控功能，所以才躲过这一调控机制，不会自我毁灭。 细胞凋亡检测 1、 早期检测: 1) PS(磷脂酰丝氨酸)在细胞外膜上的检测 2)细胞内氧化还原状态改变的检测 3)细胞色素 C 的定位检测 4) 线粒体膜电位变化的检测 2、 晚期检测： 细胞凋亡晚期中，核酸内切酶在核小体之间剪切核 DNA，产生大量长度在 180-200 bp 的DNA 片段。 对于晚期检测通常有以下方法： 1) TUNEL(末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记) 2) LM-PCR Ladder (连接介导的 PCR 检测) 3) Telemerase Detection (端粒酶检测) 3、生化检测： 1）典型的生化特征：DNA 片段化 2）检测方法主要有：琼脂糖凝胶电泳、原位末端标记（TUNEL）等 3）TUNEL（末端脱氧核苷酸转移酶介导的 dUTP 缺口末端标记） 4）通过 DNA 末端转移酶将带标记的 dNTP （多为 dUTP）间接或直接接到 DNA 片段的3’-OH 端，再通过酶联显色或荧光检测定量分析结果。可做细胞悬液、福尔马林固定或石蜡处理的组织、细胞培养物等多种样本的检测。 4、LM-PCR Ladder (连接介导的 PCR 检测) 当凋亡细胞比例较小以及检测样品量很少（如活体组织切片）时，直接琼脂糖电泳可能观察不到核 DNA 的变化。通过 LM-PCR,连上特异性接头，专一性地扩增梯度片段，从而灵敏地检测凋亡时产生梯度片段。此外，LM-PCR 检测是半定量的，因此相同凋亡程度的不同样品可进行比较。如果细胞量很少，还可在分离提纯 DNA 后，用 32P-ATP 和脱氧核糖核苷酸末端转移酶（TdT）使 DNA 标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中 DNA ladder 的形成。 上述两种方法都针对细胞凋亡晚期核 DNA 断裂这一...
