第1页共5页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第1页共5页猪呼吸道疾病综合征基因芯片诊断方法的建立与应用高淑霞2,4吴时友1尹燕博1庄文忠3牛钟相2(1.山东澳兰生物工程研究院,山东青岛261001;2.山东农业大学动物科技学院,山东泰安271018;3.山东省农业厅,山东济南250013;4.山东省农业科学院山东济南250100)摘要：根据Genbank发表的核酸序列，分别设计合成流感病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型和猪伪狂犬病病毒的特异引物,应用PCR（或RT-PCR）分别扩增各病毒的特异片断，并克隆到pMD18-TSimpleVector构建重组质粒，用于各病毒探针的制备。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上，制备成低密度基因芯片。在多重PCR过程中，用生物素标记的dUTP(Bio-11-dUTP)对待检样品进行标记，扩增产物与基因芯片杂交，最后用扫描仪进行读片和分析。对临床疑似病例检测结果表明，该方法可以同时检测待检样品中4种病毒的存在情况，与PCR方法相比，显示了较高的灵敏度。该方法的建立，为批量样品的检测和猪呼吸道疾病综合征流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。关键词：呼吸道疾病综合征；基因芯片；多重PCR；核酸杂交LowDensityDNAarrayforDiagnosingPorcineRespiratoryDiseaseComplexGAOShuxia2,4,WUShiyou1,YINYanbo1,ZHUANGWenzhong3,NIUZhongxiang2(1ShandongOlandInstituteofBioengineering,Qingdao261001;2CollegeofAnimalScienceandTechnology,ShandongAgricultureUniversity,Tai’an2710183.ShandongAgricultureoffice,Jinan250013;4ShandongAcademyofAgricultureScience,250100)Abstract：BasedonthepublishednucleotidesequencesofInfluenzaAvirus,Porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,Porcinecirocovirus-2andPorcinepseudorabiesvirus,4pairsofprimersweredesigned.AndconservedDNA(orcDNA)fragmentsofthe4virusesobtainedbyusingPCR(orRT-PCR),wereligatedwithpMD18-TSimpleVectortoconstructrecombinantplasmidforDNAprobepreparation.TherecoveredDNAprobeswerespottedonlocatedsitesonnitrocellulosefiltertopreparelowdensityDNAarray.DuringtheprocessofmultiplexPCR,sampleswerelabeledbyBiotin-11-dUTP.ThenthelabeledPCRproductswerehybridizedwithDNAarrays,andthehybridizationsignalswerescannedandanalyzedbyscanningdeviceandsoftware.TheresultsshowedthatthisDNAarraycouldidentifyanddistinguishthe4virusesinsamplessynchronouslyandwasmoresensitivethanPCRmethod.Thismethodcanbeuseforlabdiagnosis,epidemiologyinvestigationandquarantineofanimalandanimalproductsinalarge-scale.Keywords：Porcinerespiratorydiseasecomplex;DNAarray;multiplePCR;nucleotidehybridization*correspondingauthor：Email：猪呼吸道疾病综合征（porcinerespiratorydiseasecomplex,PRDC）是九十年代中期在北美提出的，用来描述当时出现的一种呼吸道疾病，主要症状是：咳嗽和呼吸困难，并伴有采食量下降、生长停滞常发生在肥育猪群。诱发此病的主要因素是：仔猪的早期隔离断乳和以及断乳后的多点饲养管理、呼吸道病毒（PRRSV、SIV、PRV）的感染和猪肺炎支原体的存在[1]。PRDC的病原因子既包括病毒,也包括细菌，其中PRRSV、肺炎支原体和PCV-2能够直接危害呼吸道免疫系统，是PRDC的主要影响因子[2]。由于多病原的混合感染，使病情复杂化，增加了诊断和防治难度，给从业者造成严重的经济损失。第2页共5页第1页共5页编号：时间：2021年x月x日书山有路勤为径，学海无涯苦作舟页码：第2页共5页作者简介：高淑霞（1969－），女，在读博士，主要从事动物微生物与免疫学方面的研究。基金项目：山东科学技术厅资助项目（项目编号：022010103）*通讯作者：为此，我们采用新近发展起来的基因芯片技术，借助多重PCR、核酸杂交以及核酸标记技术,建立了可同时检测猪流感病毒（swineinfluenzavirus,SIV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcinereproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)、猪圆环病毒2型(porcinecirocovirus-2,PC...
