..抗菌药物最小抑菌浓度的测定一、概念：最小抑菌浓度〔minimuminhibitoryconcentration,MIC〕：在特定环境下孵育24小时，可抑制某种微生物出现明显增长的最低药物浓度即最小抑菌浓度，用于定量测定体外抗菌活性。二、实验目的：通过采用常量稀释法,检测几种抗菌药物对----菌株的最小抑菌浓度(MIC),对临床诊断用药有指导作用。三、仪器和试剂：MH液体培养基分光光度计MH琼脂蒸馏水0.1mol磷酸缓冲液〔PH6.0〕无菌生理盐水无菌滤膜0.22金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌无菌试管0.5麦氏标准比浊管微量加样器吸头接种环无菌平板无菌针筒抗菌药物四、检验方法：液体稀释法、琼脂稀释法、E试验〔Etest〕液体稀释法操作步骤：抗菌药物原液配置MH液体试管中抗菌药物梯度稀释待测菌和质控标准菌观察结果..word....1..抗菌药物原液制备抗菌药物贮存液浓度不应低于1000μg/ml(如1280μg/ml)或10倍于最高测定浓度。溶解度低的抗菌药物可稍低于上述浓度。所需抗菌药物溶液量或粉剂量可公式进展计算。例如：需配制100ml浓度为1280μg/ml的抗生素贮存液，所用抗生素为粉剂，其药物的有效力为750μg/mg。用分析天平准确称取抗生素粉剂的量为182.6mg。根据公式计算所需稀释剂用量为：〔182.6mg×750μg/ml〕/1280μg/ml=107.0ml，然后将182.6mg抗生素粉剂溶解于107.0ml稀释剂中。制备抗菌药物贮存液所用的溶剂和稀释剂见表1。配制好的抗菌药物贮存液应贮存于-20℃环境，并注意抗菌药物的保存期限。表1稀释法中常用的抗菌药物容积稀释法药物浓度取药液量加稀释剂量药物稀释浓琼脂或肉汤中最后含药浓度〔ug/ml〕〔ml〕〔ml〕度〔ug/ml〕〔ug/ml〕药物：琼脂〔或肉汤〕=1：95120512051201280128012801601601602020201111111111110131371371375120256012806403201608040201052.551225612864321684210.50.25..word....2.52.52.51111371.250.60.30.1250.060.032.药敏试验用抗菌药物浓度X围根据NCCLS抗菌药物敏感性试验操作标准，药物浓度X围应包含耐药、中介和敏感分界点值，特殊情况例外。3.培养基NCCLS推荐使用Mueller-Hinton〔MH〕肉汤，pH7.2~7.4。需氧菌及兼性厌氧菌在此培养基中生长良好。在测试葡萄球菌对苯唑西林的敏感性时，应在肉汤中参加2%〔W/V〕氯化钠，按制造厂家的要求配制需要量的MH肉汤。嗜血杆菌属菌使用HTM肉汤，肺炎链球菌和其它链球菌使用含2%~5%溶解马血的MH肉汤。4.接种物的制备有2种方法配制接种物，一是细菌生长方法，用接种环挑取形态相似待检菌落3-5个，接种于4-5ml的水解酪蛋白〔MH〕肉汤中，35℃孵育2-6h。增菌后的对数生长期菌液用生理盐水或MH肉汤校正浓度至0.5麦氏比浊标准，约含1~2×108CFU/ml。二是直接菌落悬液配制法，对某些苛养菌，如流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌和链球菌及甲氧西林耐药的葡萄球菌等菌株，推荐直接取培养18~24h的菌落调配成0.5麦氏比浊标准的菌悬液。用MH肉汤将上述菌悬液进展1∶100稀释后备用。注意应在15分钟内接种完配制好的接种物，并取一份接种物在非选择性琼脂平板上传代培养，以检查接种物纯度。5.稀释抗菌药物的制备及菌液接种取无菌试管〔13×100mm〕13支，排成一排，除第1管参加1.6mlMH肉汤外，其余每管参加MH肉汤1ml，在第1管参加抗菌药物原液〔如1280μg/ml〕0.4ml混匀，然后吸取1ml至第2管，混匀后再吸取1ml至第3管，如此连续倍比稀释至第11管，并从第11管中吸取1ml弃去，第12管为不含药物的生长对照。此时各管药物浓度依次为256、128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25μg/ml。然后在每管内参加上述制备好的接种物各1ml，使每管最终菌液浓度约为5×105CFU/ml。第1管至第11管药物浓度分别为128、64、32、16、8、4、2、1、05、0.25、0.125μg/ml。另外设对照3支，别为肉汤对照、质控菌对照和待测菌生长对照。6.孵育将接种好的稀释管塞好塞子，置35℃普通空气孵箱中孵育16~20h；嗜血杆菌和链球菌在普通空气孵箱中孵育20~24h；对可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐万古霉素肠球菌应持续孵育满24h。7.结果判断与解释在读取和报告所测试菌株的MIC前，应检查生长对照管的细菌生长情况是否良好，同时还应检查接种物的传代培养情况以确定其...
