DNA重组技术的基本工具VIP专享VIP免费

生长快、肉质好的转基因鱼(中国)乳汁中含有人生长激素的转基因牛(阿根廷)转基因实例一、基因工程的概念：又叫做基因拼接技术基因拼接技术或DNADNA重组技术重组技术。通俗的说，就是按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向定向地改造生物的遗传性状遗传性状。原理操作环境操作对象操作水平基本过程结果基因重组生物体外基因/DNA分子水平剪切→拼接→导入→表达人类需要的基因产物回顾：优点：定向定向地改造生物的遗传性状遗传性状；实现基因在不同物种之间的转移，迅速培育出生物新品种1．基因拼接的理论基础(1)大多数生物的遗传物质是DNA。(2)DNA的基本组成单位都是四种脱氧核苷酸。(3)双链DNA分子的空间结构都是规则的双螺旋结构。一、基因工程诞生的理论基础2．外源基因在受体内表达的理论基础(1)基因是控制生物性状的独立遗传单位。(2)遗传信息的传递都遵循中心法则。(3)生物界共用一套遗传密码。1.1DNA重组技术的基本工具工欲善其事,必先利其器.想一想:获得转基因抗虫棉需要做哪些工作呢?实现这一精确的操作过程的工具是什么呢?•准确切割DNA的工具（“分子手术刀”）——限制性核酸内切酶•DNA片段的连接工具（“分子缝合针”）——DNA连接酶•基因转移工具（“分子运输车”）——基因进入受体细胞的载体二、DNA重组技术的基本工具•原核生物为什么没有在长期的进化过程中由于外源DNA的入侵而灭绝，有什么保护机制？限制性内切酶从哪里寻找？（一）限制性核酸内切酶防止外来病原物的侵害。当外源防止外来病原物的侵害。当外源DNADNA侵入侵入时，会利用限制酶时，会利用限制酶将外源将外源DNADNA切割切割掉，以掉，以保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物保证自身的安全。所以，限制酶在原核生物中主要起到中主要起到切割外源切割外源DNADNA、使之失效、使之失效，从，从而达到而达到保护自身保护自身的目的。的目的。限制性核酸内切酶的作用特点：1.能识别特定核苷酸序列；2.从特定部位的两个核苷酸之间切开。限制性内切酶限制酶黏性末端和平末端限制酶所识别的序列有什么特点•限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中心轴线，中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称重复排列的。•限制酶的识别序列：限制酶的识别序列：能被限制性内切酶特异性识别的切割部位都具有回文序列：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。限制性核酸内切酶——“分子手术刀”(1)来源:主要是从原核生物中分离纯化出来的。(2)化学本质：蛋白质。(3)作用(4)作用特点：特异性,即限制酶可识别特定的脱氧核苷酸序列,切割特定位点。(5)切割方式催化作用,所以可重复利用可用于DNA的切割获取目的基因和载体的切割错位切：产生两个相同的黏性末端平切：形成平末端限制酶DNA解旋酶区别限制性内切酶与限制性内切酶与DNADNA解旋酶的区别解旋酶的区别切割特定的核苷酸序列的磷酸二酯键将DNA两条链的氢键打开形成两条单链1、种类：2、作用：两类E·coliDNA连接酶T4DNA连接酶将双链将双链DNADNA片段片段““缝合缝合”起来，”起来，恢复被恢复被限制酶切限制酶切开的两个核苷开的两个核苷酸之间的之间的磷酸二酯键,这样一个重组这样一个重组的的DNADNA分子就形成了。分子就形成了。（二）、（二）、分子缝合针──DNA连接酶33、、E·coliE·coliDNADNA连接酶连接酶与与T4DNAT4DNA连接酶比较连接酶比较：：类型来源来源E·coliE·coliDNADNA连接连接酶酶TT44DNADNA连接酶连接酶功能功能大肠杆菌大肠杆菌TT44噬菌体噬菌体恢复恢复磷酸磷酸二酯键二酯键只能连接只能连接黏性末端黏性末端能连接能连接黏性末端黏性末端和和平末端平末端((效率较低效率较低))相同点相同点差别差别可把黏性末端之间的可把黏性末端之间的缝隙“缝合”缝隙“缝合”起来，起来，E·coliDNAE·coliDNA连接酶或连接酶或TT44DNADNA连接酶连接酶即即恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的磷酸二酯键TT44DNADNA连接酶连接酶还可把还可把平末端之间的缝隙“缝合”平末端之间的缝隙...