第2节_基因工程的基本操作程序VIP免费

1.2基因工程的基本操作程序①目的基因的获取②基因表达载体的构建（核心）③将目的基因导入受体细胞④目的基因的检测与鉴定一、基因工程基本操作的四个步骤一、目的基因的获取(一)目的基因：主要是___________________编码蛋白质的基因（二）获取目的基因的常用方法从基因文库中获取利用PCR技术扩增人工合成1)基因文库1.从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库2)基因文库的种类:种类基因组DNA文库：含有一种生物的全部基因部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因，如：cDNA文库cDNA文库的构建-----反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。杂交双链(单链RNA/单链DNA)单链DNA双链DNA(cDNA)目的基因的mRNA某种酶DNA聚合酶反转录酶3)目的基因获取的依据:P9基因的核苷酸序列基因的、、基因的、基因的。基因在染色体上的位置转录产物mRNA翻译产物蛋白质功能①概念：PCR全称为_______________，是一项在生物____复制________________的核酸合成技术。多聚酶链式反应体外特定DNA片段2.利用PCR技术扩增目的基因②前提条件:有一段已知目的基因的序列，以使根据这一序列合成。核苷酸序列引物③原理：DNA双链复制（DNA热变性原理、DNA的方向、引物、TaqDNA聚合酶）1.变性（90℃-95℃）双链DNA模板在热作用下，_____断裂，形成________氢键单链DNA2.复性(55-60℃℃)温度降低，与DNA模板结合，形成局部______。双链引物3.延伸（70-℃75℃）在的作用下，从引物的连接，合成与模板互补的DNA链。3′端脱氧核苷酸Taq酶④过程:动态演示具体过程⑤扩增形式及结果：指数扩增，数量约为。（n代表）2n扩增循环的次数PCR技术扩增与DNA复制的比较PCR技术DNA复制相同点原理原料条件不同点解旋方式场所酶结果碱基互补配对四种脱氧核苷酸模板、能量、酶高温下变性解旋解旋酶催化体外复制(PCR扩增仪内)主要在细胞核内热稳定的DNA聚合酶（Taq酶）大量的DNA片段形成整个DNA分子解旋酶、普通的DNA聚合酶等3.人工合成1)反转录法：杂交双链(单链RNA/单链DNA)单链DNA双链DNA(cDNA)目的基因的mRNA某种酶DNA聚合酶反转录酶2）根据已知的氨基酸序列合成DNA法：蛋白质的氨基酸序列mRNA的核苷酸序列基因的脱氧核苷酸序列推测推测目的基因化学合成3.人工合成基因较小，核苷酸序列己知•甲、乙两图表示从细菌细胞中获取目的基因的两种方法，以下说法中错误的是（）•A．甲方法可建立该细菌的基因组文库•B．乙方法可建立该细菌的cDNA文库•C．甲方法要以脱氧核苷酸为原料•D．乙方法需要逆转录酶参与C二、基因表达载体的构建（核心）①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代②使目的基因能够表达和发挥作用1、基因表达载体构建的目的2、基因表达载体的组成启动子目的基因终止子标记基因位于基因的首端,它是mRNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因转录。位于基因的末端,终止转录。鉴别受体细胞中是否含有目的基因1.构建基因表达载体需要哪些工具？限制酶、DNA连接酶、运载体。（其中有两种工具酶）•用同一种限制酶切割表达载体和目的基因3、基因表达载体的构建步骤↓DNA连接酶将目的基因和表达载体进行“缝合”↓形成重组DNA分子2.为什么要构建基因表达载体？为什么不能将目的基因直接导入受体细胞？①使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代。②使目的基因能够表达和发挥作用。目的基因一定是经过限制酶切割过的基因，那么其结构已经不完整，缺少启动子等调控序列，不可能在受体细胞中表达和发挥作用，会作为异物被分解或派出。3.作为基因工程表达载体，只需含有目的基因就可以完成任务吗？为什么？不可以。因为目的基因在表达载体中得到表达并发挥作用，还需要有其他控制元件，如启动子、终止子和标记基因等。4.两种不同生物的DNA能拼接的遗传学理论基础是什么？•①都以DNA为遗传物质；•②都有四种脱氧核苷酸；•③都具有规则的双螺旋结构；•④都遵循碱基互补配对原则；•⑤共用一套密码子。三.将目...