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蛋白酶分离纯化技术蛋白酶分离纯化技术2005/20062005/2006华南师范大学生命科学学院第七节电泳分离第七节电泳分离带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电带电粒子在电场中向着与其本身所带电荷相反的电极移动的过程称为电泳。极移动的过程称为电泳。电泳方法各式各样，使用的支持物电泳方法各式各样，使用的支持物((体体))的不同，可的不同，可以分为以分为纸电泳纸电泳薄层电泳薄层电泳((硅胶硅胶GG薄层薄层))薄膜电泳薄膜电泳((醋酸纤微素薄膜醋酸纤微素薄膜))凝胶电泳凝胶电泳等电聚焦电泳等电聚焦电泳一电泳的基本原理一电泳的基本原理不同的蛋白酶的带电性质（带电量和带何种电荷），大不同的蛋白酶的带电性质（带电量和带何种电荷），大小和形状不同，在一定的电场下，它们的移动方向和移动小和形状不同，在一定的电场下，它们的移动方向和移动速度也不同，从而得到分离。速度也不同，从而得到分离。⃈⃈可分离不同的蛋白酶可分离不同的蛋白酶((制备性电泳制备性电泳))⃈⃈分析其蛋白性质如分子量和等电点等分析其蛋白性质如分子量和等电点等((分析性电泳分析性电泳))⃈⃈移动方向移动方向颗粒在电场中的移动方向，决定于它们所带电荷的种类颗粒在电场中的移动方向，决定于它们所带电荷的种类※※带正电荷的颗粒向电场的负极移动带正电荷的颗粒向电场的负极移动※※带负电荷的颗粒则向电场的正极移动带负电荷的颗粒则向电场的正极移动※※净电荷为零的颗粒在电场中不移净电荷为零的颗粒在电场中不移动动⃈⃈移动速度移动速度在电场中，颗粒的泳在电场中，颗粒的泳((移移))动速度通常用迁移率来表示。动速度通常用迁移率来表示。迁移率是指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度迁移率是指带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度在电场中的泳动速度主要决定于在电场中的泳动速度主要决定于‽‽颗粒（蛋白酶）本身所带的颗粒（蛋白酶）本身所带的净电荷量净电荷量净电荷量越多净电荷量越多,,泳动速度越快泳动速度越快‽‽颗粒（蛋白酶）的颗粒（蛋白酶）的大小大小分子量越小分子量越小,,泳动速度越快泳动速度越快‽‽颗粒（蛋白酶）的颗粒（蛋白酶）的形状形状球型较快球型较快,,泳动速度越快泳动速度越快‽‽电场强度电场强度越大越大,,泳动速度越快泳动速度越快‽‽溶液溶液pHpH值值溶液溶液pHpH值决定了溶液中蛋白酶的带电的性质如带何种值决定了溶液中蛋白酶的带电的性质如带何种电荷个带电的多少电荷个带电的多少‽‽离子强度离子强度溶液的离子强度越高，颗粒的泳动速度则越慢。反之则越快。一般电泳溶液的离子强溶液的离子强度越高，颗粒的泳动速度则越慢。反之则越快。一般电泳溶液的离子强度为度为0.02-0.20.02-0.2‽‽电渗电渗在电场中，液体对于固体支持物的相对移动称为电渗在电场中，液体对于固体支持物的相对移动称为电渗在毛细管电泳中，毛细管是由石英为材料，含硅酸成分，在毛细管电泳中，毛细管是由石英为材料，含硅酸成分，带负电荷，使毛细管中溶液感应而带正电荷。水分子便向负极带负电荷，使毛细管中溶液感应而带正电荷。水分子便向负极移动，并带动溶液中的蛋白酶等颗粒一起向负极移动移动，并带动溶液中的蛋白酶等颗粒一起向负极移动€€若蛋白酶带负电，泳动速度则变慢若蛋白酶带负电，泳动速度则变慢一般要选择电渗较少的固体支持物一般要选择电渗较少的固体支持物((不带电不带电))€€若带正电，泳动速度则加快若带正电，泳动速度则加快€€若不带电，颗粒也会向负极移动若不带电，颗粒也会向负极移动二，电泳技术的应用范围二，电泳技术的应用范围‽‽酶的纯度鉴定（分析电泳）酶的纯度鉴定（分析电泳）SDS-PAGESDS-PAGE、、PAGEPAGE、、IEFIEF（（电泳纯）电泳纯）‽‽酶酶全酶和亚基分子量全酶和亚基分子量测定测定SDS-PAGESDS-PAGE、、PAGEPAGE‽‽pIpI测定测定IEFIEF‽‽酶的分离纯化（制备电泳）酶的分离纯化（制备电泳）三，主要采用的电泳技术三，主要采用的电泳技术((支持物支持物))‽‽聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳同时具有电荷和分子筛的双重作用，故具很高的分辨同时具有电荷和分子筛的双重作用，故具很高的分辨率率€€Na...