DNADNA的粗提取与鉴定的粗提取与鉴定一、基础知识一、基础知识(一)提取(一)提取DNADNA的方法的方法11、提取生物大分子的基本思路、提取生物大分子的基本思路选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理选用一定的物理或化学方法分离具有不同物理或化学性质的生物大分子或化学性质的生物大分子22、提取、提取DNADNA的基本思路的基本思路利用利用DNADNA与与RNARNA、蛋白质和脂质等在物理和、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异,提取化学性质方面的差异,提取DNADNA,去除其他成,去除其他成分分3.DNA3.DNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNADNA充充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反分溶解,而使杂质沉淀,或者相反3.DNA3.DNA的溶解性的溶解性DNADNA和蛋白质等其他成分在不同浓度的和蛋白质等其他成分在不同浓度的NaClNaCl溶液中溶解溶液中溶解度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使度不同,利用这一特点,选择适当的盐浓度就能使DNADNA充充分溶解,而使杂质沉淀,或者相反分溶解,而使杂质沉淀,或者相反①①根据根据DNADNA在在NaClNaCl溶液中溶液中的溶解度曲线图,思考在什的溶解度曲线图,思考在什么浓度下,么浓度下,DNADNA的溶解度最的溶解度最小?小?DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶液中的溶解度是如何变化的溶解度是如何变化的??①①根据根据DNADNA在在NaClNaCl溶液中溶液中的溶解度曲线图,思考在什的溶解度曲线图,思考在什么浓度下,么浓度下,DNADNA的溶解度最的溶解度最小?小?DNADNA在在NaClNaCl溶液中的溶液中的溶解度是如何变化的溶解度是如何变化的??在NaCl溶液浓度低于0.14mol/L时,DNA的溶解度随NaCl溶液浓度的增加而逐渐降低;在0.14mol/L时,DNA溶解度最小;当NaCl溶液浓度继续增加时,DNA的溶解度又逐渐增大。②②如何通过控制如何通过控制NaClNaCl溶液溶液的浓度使的浓度使DNADNA在盐溶液中溶在盐溶液中溶解或析出?解或析出?②②如何通过控制如何通过控制NaClNaCl溶液溶液的浓度使的浓度使DNADNA在盐溶液中溶在盐溶液中溶解或析出?解或析出?当氯化钠的物质的量浓度为2mol/L时,DNA的溶解度最大,浓度为0.14mol/L时,DNA的溶解度最低。利用这一原理,可以使DNA在盐溶液中溶解或析出DNADNA不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物不溶于酒精溶液,但是细胞中的某些物质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将质则可以溶于酒精。利用这一原理,可以将DDNANA与蛋白质进一步分离与蛋白质进一步分离55、、DNADNA在酒精溶液中的溶解性在酒精溶液中的溶解性66、、DNADNA对酶、高温和洗涤剂的耐受性对酶、高温和洗涤剂的耐受性①①蛋白酶能水解蛋白质,但是对蛋白酶能水解蛋白质,但是对DNADNA没有影没有影响响②②大多数蛋白质不能忍受大多数蛋白质不能忍受6060--80℃80℃的高温,的高温,而而DNADNA在在80℃80℃以上才会变性以上才会变性③③洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和洗涤剂可以溶解细胞的细胞膜,去除脂质和蛋白质蛋白质,,但对但对DNADNA没有影响没有影响77、、DNADNA的鉴定的鉴定DNADNA与与二苯胺(沸水浴)二苯胺(沸水浴)会染成会染成蓝色蓝色,因此,,因此,二苯胺可以作为鉴定二苯胺可以作为鉴定DNADNA的试剂的试剂二、实验设计二、实验设计(一)实验材料的选取(一)实验材料的选取11、材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、、材料:鱼卵、猪肝、菜花、香蕉、鸡血、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、哺乳动物的红细胞、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜、在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取在液体培养基中培养的大肠杆菌。(从中选取22~~33种实验材料)种实验材料)22、原则:凡是含有、原则:凡是含有DNADNA的生物材料都可以的生物材料都可以考虑,但选用考虑,但选用DNADNA含量相对较高的生物组织,含量相对较高的生物组织,成功的可能性更大成功的可能性更大动物细胞的破碎较易,例如,在鸡血细胞液中动物细胞的破...