血涂片制备、染色及白细胞形态观察医学技术学院胡淼联系电话：13409204917实验内容•1.血涂片制备•2.血涂片染色•3.正常白细胞形态观察目的目的：：掌握血涂片的制备方法、瑞吉氏染色方法，观察正常白细胞形态。染色原理染色原理：：根据不同种类细胞及细胞的不同成分，对酸性及碱性染料结合能力不同，而使各种细胞呈现各自的特点。器材器材：载玻片、推片、染架、吸耳球、显微镜、微量吸管、拭镜纸。试剂试剂：瑞吉氏染液、磷酸盐缓冲液、香柏油、乙醇-乙醚溶液。标本标本：抗凝血。左手持载玻片，右手持推片，将推片置血滴前方，向后移动到接触血滴，使血滴沿推片边缘展开成线状。1.1.血涂片制血涂片制备备1.1.血涂片制血涂片制备备血液充分抗凝。微量吸管虹吸取血7-8μl，置血滴于载玻片一端。推片与载片呈30°～40°角，向另一端匀速地推出。血涂片制血涂片制备备血涂片制血涂片制备备血涂片制血涂片制备备血涂片制血涂片制备备推片载玻片血液将推片匀速向前，勿停顿。涂片的厚薄取决于速度和角度。一张满意的血涂片应厚薄均匀头体尾涂片干燥后用铅笔在血涂片的头部写上姓名和编号李四B1232.2.血涂片染血涂片染色色2.2.血涂片染血涂片染色色再加瑞氏染色Ⅱ液5-8滴，Ⅰ液和Ⅱ液充分混匀静置5分钟直接在无血膜处无血膜处流水冲洗3-5分钟血涂片干燥后用油镜分类计数200个白细胞李四123涂片干燥后加瑞氏染色Ⅰ液5-8滴覆盖整个血膜1分钟•1.1.玻片清洗：新玻片玻片清洗：新玻片常有游离碱质常有游离碱质,,因此应用因此应用清洗液或清洗液或10%10%盐酸浸泡盐酸浸泡24h,24h,然后再彻底清洗然后再彻底清洗。。用过的玻片用过的玻片可放入适量肥皂水煮沸可放入适量肥皂水煮沸20min,20min,再再用热水将肥皂和血膜洗去用热水将肥皂和血膜洗去,,自来水反复冲洗自来水反复冲洗,,必要时再置必要时再置95%95%乙醇中浸泡乙醇中浸泡1h,1h,然后然后擦干或烤擦干或烤干干备用。备用。•22..使用玻片：使用玻片：只能手持玻片边缘只能手持玻片边缘,,切勿触及玻切勿触及玻片表面片表面,,以保持玻片清洁、干燥、中性、无油以保持玻片清洁、干燥、中性、无油腻。腻。注意事项注意事项玻片•3.3.良好的血涂片良好的血涂片,,厚薄适宜厚薄适宜,,头体尾分明头体尾分明,,分布均匀分布均匀,,边缘整齐边缘整齐,,两侧留有空隙。两侧留有空隙。血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。血滴越大，角度越大，速度越大，血膜越厚。•4.4.血涂片血涂片干透干透后方可染色，否则染色过程中后方可染色，否则染色过程中血膜容易脱落。血涂片制好后最好血膜容易脱落。血涂片制好后最好立即固定立即固定染色染色,,以免细胞溶解和发生退行性变。以免细胞溶解和发生退行性变。注意事项注意事项推片•5.5.HH++影响细胞染色影响细胞染色,,配制染液必须用配制染液必须用优质甲醇优质甲醇,,稀释染稀释染液必须用液必须用缓冲液缓冲液,,近中性水近中性水冲洗冲洗,,否则各种细胞染色反否则各种细胞染色反应异常应异常,,致使细胞的识别困难致使细胞的识别困难,,甚至造成错误。甚至造成错误。•6.6.染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染色时间与染液浓度、室温高低、细胞多少有关。染染液越淡、室温越低、细胞越多液越淡、室温越低、细胞越多,,染色时间越长或适当增染色时间越长或适当增加染液量。加染液量。•7.7.染液不可过少染液不可过少,,以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难以防蒸发干燥染料沉着于血涂片上难冲洗干净。冲洗干净。流水冲去染液流水冲去染液,,不能先倒掉染液不能先倒掉染液,,以免染料以免染料沉着于血涂片上。沉着于血涂片上。冲洗时间冲洗时间不宜过久，以防脱色。不宜过久，以防脱色。注意事项注意事项染色染色3.3.血涂片的观血涂片的观察察3.3.血涂片的观血涂片的观察察低倍镜观察低倍镜观察1.染色情况(满意、偏酸、偏碱）2.细胞分布情况油镜下分类计数：体尾交界处。油镜下分类计数：体尾交界处。油镜分类时应按一定走向，不要重复计数。李四123中性杆状核粒细胞中性杆状核粒细胞中性分叶核粒细胞中性分叶核粒细胞单核细胞单核细胞嗜酸性粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞嗜碱性粒细胞淋巴细...
