爱爱医资源-免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用VIP免费

免疫胶乳浊度分析在自动生化分析仪上的应用免疫比浊回顾免疫胶乳浊度分析（immunolatexturbidimetry）在生化分析仪上进行测定的有关问题2免疫比浊3免疫检测的基础抗原抗体间的特异性反应手工操作自动化分析核心—基础免疫比浊技术是在免疫沉淀反应（Precipitation）检测法的基础上建立的。最早应用的免疫沉淀反应是Ouchterlony在1948年建立的琼脂双向扩散法。1965年Mancini等和Fahey等分别建立了可以定量的单向（辐射状）免疫扩散技术。Laurell等1966年建立了电免疫扩散法，使报告结果的时间由单向免疫扩散法的≥24h缩短到4-5h。4免疫比浊经典的免疫沉淀试验通常是在抗原与相应抗体反应的终点判定结果，存在费时、操作繁琐、敏感度低（10～100mg/L）、不能自动化等缺陷。根据沉淀反应时，抗原抗体结合后可使反应系统透光度发生改变，建立了以测定透光度为特征的微量免疫沉淀测定法法，既免疫浊度测定技术。5免疫比浊1967年由Richie首次报告，20世纪70年代逐步完善，80年代初期初步应用临床常规检查。抗原抗体在液相（特殊的缓冲液）中快速结合，形成抗原抗体复合物，反应液出现浊度。6免疫比浊液相中抗原与抗体的反应结果与两者的浓度比例有关。抗原或抗体显著过量时，都只能生成少量的可溶性免疫复合物，分子极小，不适于免疫比浊法检测。免疫比浊技术要求溶液中抗体要保持中等过量，此时免疫复合物（immunecomplex，IC）仍是可溶性的。在这种情况下，抗原与抗体的反应遵循质量作用定律（Ag+Ab＝Ag.Ab），形成IC的量是抗原或抗体的函数。当抗体固定时，IC的量与抗原的量成正比。7免疫比浊8LIGHTSOURCEFILTERREACTIONCUVETTETURBIDIMETRICDETECTORNEPHELOMETRICDETECTORIC散射比浊、透射比浊光路图θ透射光+散射光散光射平光线目前，国内开展的各项免疫检验，均求使用国家食品药品监督管理局（SFDA）准入和批准的仪器和试剂。这样做不仅能使各项检查更加统一，规范，各实验室之间检查结果更具可比性，而且也可避免很多不必要的医疗纠纷。免疫比浊技术中散射比浊法目前均用获国家食品药品监督管理局（SFDA）批准进口的自动化分析仪器和配套的各种检测项目的专用试剂。透射比浊法（生化分析仪）可用国产试剂。9——全国临床检验操作规程第3版透射还是散射散射比浊专用仪器专用配套试剂原装进口试剂昂贵透射比浊生化分析仪开放试剂（可用国产试剂）10a)速率法和终点法测定；b)速率法的灵敏度和特异性优于终点法；终点法的稳定性较好；透射还是散射目前，由于技术的发展，两种比浊法的灵敏度和特异性已接近，而全自动生化仪的自动化程度和精密度要胜于专用散射比浊仪，透射免疫比浊法在临床上的应用日益广泛。生化分析仪通过免疫比浊法技术，架起了现代生化检验和现代免疫技术的桥梁。免疫化学是免疫学技术和生物化学技术的结合。既具有免疫学抗原抗体结合的特异性，又具有生物化学反应动力学特点。11透射还是散射透射免疫比浊可溶性抗原与其特异性抗体，在一定缓冲液中形成的复合物，经一段时间聚合后出现浊度，人射光在渗过反应液时，由于溶液内IC粒子对光线的反射和吸收，引起透射光减少，可用吸光度A表示。用已知浓度的标准参考品建立标准曲线，测出待测抗原的含量。透射比浊法主要用于生化分析仪。12透射免疫比浊免疫复合物直径为35～lOOnm，这一范围要求近紫外光处入射光发出最大的干扰(最大吸收峰)，选择290～410nm波长测定最佳。由于抗原抗体结合后在短时间内(<19s)只能形成小复合物，无法进行比浊，需要等几分钟到数小时(>19s)形成可见的复合物，才能进行比浊。为了提高复合物形成速度，加入促聚剂，如4％聚乙二醇(MW：6000～8000)，可使复合物形成在3～10min完成。13比浊法中，少量的小的抗原抗体复合物极难形成浊度，除非放置较长时间；如形成较大的复合物，则抗原和抗体用量也较大，显然不符合微量化的要求。为解决快速反应及微量化的要求，建立了免疫胶乳浊度法（immunolatexturbidimetry）。14免疫胶乳浊度分析（immunolatexturbidimetry）其基本原理是：a)将特异性抗体吸附在大小适中、均匀一致的胶乳颗...