流式细胞仪原理和一般用法VIP免费

Partec-ExcellenceinFlowCytometryContributionstoNewDevelopmentsinMedicalDiagnosisandMicrobiology德国Partec公司中国服务中心张向阳超过41年的研发经验Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验流式细胞仪的原理流式细胞仪使用一般方法及技巧Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验流式细胞术流式细胞分析，又称流式细胞术（flowcytometry，FCM），是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。他综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、细胞化学等各门学科。Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验流式细胞术流式细胞分析，又称流式细胞术（flowcytometry，FCM），是以高能量激光照射高速流动状态下被荧光色素染色的单细胞或微粒，测量其产生的散射光和发射荧光的强度，从而对细胞（或微粒）的物理、生理、生化、免疫、遗传、分子生物学性状及功能状态等进行定性或定量检测的一种现代细胞分析技术。他综合了激光技术、计算机技术、半导体技术、流体力学、细胞化学等各门学科。Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验特点：（1）单细胞分析。（2）快速分析。（3）多参数相关测量。（4）定性或定量分析细胞。（5）统计学意义明显。（6）分选。Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验荧光有些物质，当用光照射时，它吸收了该种波长的光后还会发射出各种颜色和不同强度的光，而当光停止照射后，这种发射的光也随之消失，这种发射的光称为荧光(fluorescence)。荧光的波长比吸收光线的波长要长些。由于物质的分子结构不同，所吸收的光和所发射的荧光波长也不同。被这些物质吸收的光称为激发光，产生的发射光即荧光。荧光的颜色多为红、蓝、绿或黄等。物质的荧光有两种，一种是自发性荧光，即组织在短波长光照射下自行发射出的荧光。如，组织中的蛋白质和脂类在紫外线照射下能发射出微弱的淡蓝色荧光。另一种荧光是诱发荧光，即细胞与荧光色素结合后，经一定波长的光线照射后发出的荧光。常用的是诱发荧光，能产生荧光的生物染色剂称为荧光染料(或称荧光色素)。Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验荧光激发与发射原理能量级激发激发态发射激光能量损失Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验免疫荧光技术免疫荧光技术是根据抗原—抗体反应的原理，先将已知的抗原或抗体标记上荧光素，制成荧光抗原或抗体，再用这种荧光抗体(或抗原)作为探针检测细胞表面或细胞内的相应抗原(或抗体)。从而使形成的抗原—抗体复合物上含有标记的荧光素，利用流式细胞仪检测标本，荧光素受外来激发光的照射而发生明亮的荧光(如，黄、绿色或红色等)，通过确定抗原或抗体的性质、定位来推断细胞的信息，以及利用定量技术测定含量。常用方法：单抗直接标记Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验嵌入性染料如DAPI、赫斯特、PI等，直接与细胞内的DNA双螺旋结构中的A-T碱基对结合，从而使细胞在激发光的照射下发特定波长的光，通过判断发射光的强弱来推算A-T碱基对的多少，从而得知DNA的倍性关系。Partec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验细胞膜电位、离子、脂类探针•现已发现或开发出来了各种细胞膜电位、各类离子、pH值、脂类探针，运用这些探针在流式细胞仪上可轻易检测各种细胞功能，可实现一些意想不到的效果。•详细信息，见细胞探针公司网站：www.molecularProbes.comPartec-ExcellenceinFlowCytometry超过41年的研发经验与流式细胞仪相关的荧光术语•MESF（Moleculesofequivalentsolublefluorochrome）等量可溶性荧光分子：国际标准单位，用来衡量荧光强度•自发荧光：细胞或颗粒在激发照射下会发出各种波长的荧光。白细胞自发荧光强度为650~1150MESF，血小板及其他颗粒自发荧光更低•流式细胞仪精度：分析白细胞要求精度在600MESF以内，分析其他细胞或颗粒需要更高的精度...