二维电泳应用于糖蛋白的分离鉴定二维电泳应用于糖蛋白的分离鉴定目录糖蛋白1糖基化2凝胶电泳—分离纯化技术3基于PAS反应的染色方法4定义定义由短的寡糖链与蛋白质共价结合构成的分子。特点特点蛋白质含量较多，糖所占比例变动大，表现为蛋白质的特性。细胞膜、溶酶体、细胞外液分布分布糖蛋白（glycoprotein）膜蛋白中的糖膜蛋白分子中的糖这些寡糖链常常是具分支的杂糖链，不呈现重复的双糖系列，一般由2-10个单体（少于15）组成，未端成员常常是唾液酸或L-岩藻糖。糖蛋白的结构单糖的种类葡萄糖(Glu)半乳糖(Gal)甘露糖(Man)N-乙酰半乳糖胺(GalNAc)岩藻糖(Fuc)N-乙酰葡萄糖胺(GlcNAc)N-乙酰神经氨酸(NeuAc)连接方式N-连接：O-连接：糖蛋白的结构糖基化糖基化是蛋白质翻译后修饰最重要的方式之一，是必需的生理过程，对蛋白质生物学功能的正确发挥起着至关重要的作用。糖蛋白的形成是糖基化的一种表现形式糖基化生物活性折叠溶解度半衰期抗原性蛋白质蛋白质糖链糖蛋白分离纯化及鉴定是糖蛋白研究的重要步骤糖蛋白的分离纯化方法Capillaryelectrophoresis毛细管电泳MLC多维液相色谱electroblottillg电印迹技术gelelectrophoresis凝胶电泳电泳技术的基本原理电泳：带电粒子在电场中的定向移动。电泳：带电粒子在电场中的定向移动。等电聚焦(IsoelectrofocusingIEF)原理原理PrPr为两性电解质，不同为两性电解质，不同PrPr其其aaaa的数量、种类及占的数量、种类及占比例不同，因此比例不同，因此pIpI不同，不同，pIpI范围窄且净电荷为零，因范围窄且净电荷为零，因此依此依pIpI分离分离PrPr。。EFEF是在凝胶中加两性载体电解质，通直流电后，可是在凝胶中加两性载体电解质，通直流电后，可形成从阳极到阴极逐步增加的形成从阳极到阴极逐步增加的pHpH梯度梯度((连续的连续的,,稳定稳定的的,,线性的线性的pH)pH)。。原理原理当当PrPr在电场中迁移到它的在电场中迁移到它的PIPI时，由于净电荷为零，时，由于净电荷为零，不再移动。不再移动。如扩散，附近的凝胶会使其荷电阳、阴极会重新吸如扩散，附近的凝胶会使其荷电阳、阴极会重新吸引它回到引它回到pIpI位置。因此位置。因此PrPr只能在只能在pIpI位置被浓缩成窄、位置被浓缩成窄、稳定的带。称这种浓缩效应为聚焦。稳定的带。称这种浓缩效应为聚焦。只要凝胶中的只要凝胶中的pHpH梯度范围足够窄。便可将梯度范围足够窄。便可将pIpI相近相近的的PrPr分开，分开，EFEF是电泳技术中分辨率最高的技术。是电泳技术中分辨率最高的技术。等电聚焦(IsoelectrofocusingIEF)等电聚焦(IsoelectrofocusingIEF)返回聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)(PAGE)聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(acrylamide(acrylamide，简称，简称Acr)Acr)和交联和交联剂剂N,N-N,N-甲叉双丙烯酰胺甲叉双丙烯酰胺(N(N,,NN--methylenemethylene--bisacylamidebisacylamide,,简称简称Bis)Bis)在加在加速剂速剂NN,,NN,,NN,,NN--四甲基乙二胺四甲基乙二胺(N(N,,NN,,NN,,NN--tetramtetram--ethylethylenediamineethylethylenediamine，，简称简称TEMED)TEMED)和催化剂过硫酸铵和催化剂过硫酸铵(ammoniumpersulfate(NH(ammoniumpersulfate(NH44))22SS22OO33，简称，简称AP)AP)或核黄素或核黄素(ribofavin(ribofavin即即vitaminB2vitaminB2,,CC1717HH22OO66NN44))的作用下聚合交联成三的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳凝胶电泳(polyacrylamidegelelectrophoresis(polyacrylamidegelelectrophoresis，简称，简称PAGE)PAGE)。。电泳过程示意图电泳过程示意图AA为电泳前为电泳前33层凝胶排列顺序，层凝胶排列顺序，33层胶中均有快离子，慢离子层胶中均有快离子，慢离子BB显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。显示电泳开始后，蛋白质样品夹在快、慢离子之间被浓缩成极窄的区带。CC显示蛋白质样品分离成数个区带。显示蛋白质样品分离成数个区带。聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙...
