《叶绿体中色素的提取和分离》实验疑难VIP专享VIP免费

《叶绿体中色素的提取和分离》实验导析及典例解析一、实验关键本实验较复杂和繁琐，许多因素会影响实验结果（1）叶片要新鲜，颜色深绿。（2）研磨应迅速、充分。（3）滤液收集后，要及时用棉塞将试管口塞紧，以免滤液挥发。（4）用毛细及管在滤纸条上划滤液细线不仅细、齐，而且应有较多的色素。点拨：每次用毛细吸管画线时都会引起滤液在滤纸条上扩展，若不等干燥后重复划线，会因为浸润的范围过宽，致使色素分布的范围过宽，层析出来的色素带之间就会出现重叠不清的现象。所以越细、越齐，效果越好。（5）滤液的细线不能没入层析液中。点拨：因为滤纸上的滤液细线是叶绿体中的色素成分，这些成分易溶于有机溶剂中。层析液中含有机溶剂，如果没及滤液细线，则会将其中的色素溶解在层析液中。二、注意的问题（1）提取色素时用95%的酒精作溶剂，也可用丙酮作溶剂，但用量不宜过多，2~5mL为宜。过多会影响色素浓度，过少不易过滤。（2）漏斗基部用单层尼龙布进行过滤，也可用脱脂棉，但不可塞得太紧，否则滤液被其吸收或不易收集。注意：用单层尼龙布进行过滤目的是去掉二氧化硅、碳酸钙、破碎的细胞，获得含色素的溶液。（3）滤纸条要预先干燥处理，要剪去两角，使色素均匀扩散；画滤液细线时，要细、齐、直。注意：由于“边缘效应”使位于滤纸条两边的溶剂分子向上扩散速度快，为了“跑”出来的中间和两边的色素带尽量在同一直线上，所以滤纸条要剪去两角。（4）色素提取液一次用不完，应注意避免与空气接触和光照，因为光线和空气会将溶解的色素破坏而呈褐色。（5）根据烧杯的高度制备滤纸条，让滤纸条高度高出烧杯1cm，高出的部分作直角弯曲。在盛层析液烧杯上盖盖时，应该让培养皿的底部（平面）盖上烧杯，防止滤液纸条翘起和层析液挥发。（6）双手不要接触滤液纸面，以免被手上的油脂或其他脏物污染。（7）做完实验后，要用肥皂洗手，因接触过有毒药品，获取的滤纸条应避光保存，因色素见光易分解。（8）在提取色素时，为什么加入少许碳酸钙？答：叶绿体中的色素所处的环境是微碱性的，实验中，由于研磨会使细胞结构遭到破坏，细胞液（微酸性）流出，酸性的细胞液就会直接接触叶绿体中的色素，致使叶绿素的分子结构遭到破坏，使叶绿素失镁，呈黄褐色，加入少许碳酸钙是为了中和细胞液的酸性，起到保护叶绿素的作用。三、典例解析例1．下列有关“叶绿体色素的提取和分离”实验的叙述正确的是（）A．加入碳酸钙防止滤液挥发B．用NaCl溶液提取叶片中的色素C．用无水酒精或丙酮分离滤液中的色素D．加入二氧化硅（石英砂）有利于充分研磨解析：分离滤液中的色素用脂溶性很强的层析液。选D。例2．在叶绿体色素提取和分离实验中，收集到的滤液绿色过浅，其原因可能是（）①未加石英砂、研磨不充分②一次加入大量的无水酒精提取③分次加入少量无水酒精提取④使用放置数天的菠菜叶A．①②③B．②③④C．①③④D．①②④解析：未加石英砂、研磨不充分、使用放置数天的菠菜叶滤液色素（叶绿素）太少，绿色过浅；一次加入大量的无水酒精提取浓度太低。选D。例3．叶绿体色素的纸层析结果显示．叶绿素b位于层析滤纸的最下端，原因是（）A、分子量最小B、分子量最大C、在层析液中的溶解度最小D、在层析液中的溶解度最大解析：叶绿体中色素的分离中层析液是脂溶性很强的有机溶剂，溶解度高的色素随层析液在滤纸上扩散得快，溶解度低的色素随层析液在滤纸上扩散得慢。选C。