基因工程的基本操作程序VIP免费

1、原核细胞的基因结构非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游与RNA聚合酶结合位点启动子终止子启动子：位于基因的首端的一段特殊的DNA片断，它是RNA聚合酶识别和结合的部位，有了它才能驱动基因转录出mRNA，最终获得蛋白质终止子：位于基因的尾端的一段特殊的DNA片断，能终止mRNA的转录①不能编码蛋白质的区段：能编码蛋白质的区段,连续不间断编码区非编码区原核细胞的基因结构②有调控遗传信息表达的核苷酸序列.包括启动子和终止子非编码区非编码区编码区编码区上游编码区下游启动子终止子2、真核细胞的基因结构编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点内含子外显子能够编码蛋白质的序列叫做外显子不能够编码蛋白质的序列叫做内含子启动子终止子编码区上游编码区下游内含子：外显子：真核细胞的基因结构编码区非编码区外显子：能编码蛋白质的序列内含子：不能编码蛋白质的序列：有调控作用的核苷酸序列，包括位于编码区上游的RNA聚合酶结合位点（启动子）。非编码序列=非编码区+内含子原核细胞真核细胞不同点编码区是_____的编码区是间隔的、_____的相同点都由______和______区组成的,在编码区上游的非编码区都有与RNA聚合酶结合位点3、原核细胞与真核细胞的基因结构比较思考编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？连续不连续编码区非编码•信使RNA的加工：终止子启动子成熟的信使RNA转录加工初级转录物剪切内含子转录部分拼接外显子转录部分真核生物基因转录后的剪切、拼接和转移等过程，都需要有调控序列的调控，这是真核生物所特有的。编码区基因表达的计算基因表达的计算在真核生物中，对应的是在真核生物中，对应的是的碱的碱基数基数DNAmRNA蛋白质转录翻译663311氨基酸数氨基酸数碱基数碱基数基因中外显子基因中外显子1.2基因工程的基本操作程序基因工程基本操作的四个步骤1、目的基因的获取2、基因表达载体的构建3、将目的基因导入受体细胞4、目的基因的检测与鉴定一、目的基因的获取1）、从基因文库中获取：适用目的序列未知情况2）、利用PCR技术扩增：适用于目的基因核酸序列已知3）、人工合成：适用目的基因不是很大且序列已知的11、、目的基因：目的基因：是人们所是人们所需要转移需要转移或或改造改造的基因，的基因，它是它是编码编码某种蛋白质的结构基因。某种蛋白质的结构基因。获取目的基因是实施基因工程的第一步。获取目的基因是实施基因工程的第一步。2、获取目的基因的常用方法（一）、从基因文库中获取目的基因将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库基因文库基因组文库部分基因文库（如:cDNA文库）1、基因文库①基因组文库的构建2、基因文库的构建方法通过对受体菌的培养而储存基因②cDNA文库的构建-----反转录法：以目的基因转录成的信使RNA为模板，反转录成互补的单链DNA，然后在酶的作用下合成双链DNA，从而获得所需的基因。目的基因的mRNA单链DNA逆转录酶DNA聚合酶双链DNA(目的基因)基因组文库和部分基因文库的比较基因组文库和部分基因文库的比较文库类型文库类型cDNAcDNA文库文库基因组文库基因组文库文库大小文库大小基因中启动子基因中启动子基因中内含子基因中内含子基因多少基因多少物种间基因交流物种间基因交流小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以依据：目的基因的有关信息。如：根据基因的核苷酸序列基因的功能基因在染色体上的位置基因的转录产物mRNA基因翻译产物蛋白质等特性④从基因文库中得到目的基因的方法（二）利用PCR技术扩增目的基因1、PCR的含义——多聚酶链式反应的缩写是一项生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。通过此技术，可获取大量的目的基因。2、原理：3、前提：4、原料5、方式PCR扩增仪DNA双链复制一段已知目的基因的核苷酸序列，以合成引物以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）指数2n模板DNA；DNA引物；四种脱氧核苷酸；热稳定DNA聚合酶（Taq酶）；离子6、过程：a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板在热作用下，_____断裂，解旋形成___________b、...