多孔玻璃微珠的制作过程对固定α-淀粉酶的影响VIP专享VIP免费

24郫20037第12年月安徽化工ANHUICHEMICALINDUSrRYVo1．33，No．6Dec．2oo7多孑L玻璃微珠的制作过程对固定0c一淀粉酶的影响王宝康1,2(1．湖南农业大学，湖南长沙410128；2．安徽省第一轻工业学校，安徽蚌埠233010)摘要：用分相法制作了载体多孔玻璃微珠FXBL，用物理吸附法、共价偶联法和重氮法分别固定一淀粉酶，比较了它们的固定效果，选择了共价偶联法作为研究多孔玻璃微珠的制作过程对固定一淀粉酶的影响的实验方法。得出结论：580~(2分相玻璃优于560~C，分相时间到36h后，分相对固定化酶活力影响不大；多孔玻璃用0．3mol／L的KOH溶液扩孔3h最理想；当盐酸的浓度为0．3moFL时侵蚀成孔，固定化一淀粉酶活力达到最大值。关键词：多孔玻璃微珠；一淀粉酶；固定化酶中图分类号：TS201．2+5文献标识码：A文章编号：1008—553X(2007)06—0024—051引言多孔玻璃是具有数十到数千A微孔的玻璃。多孔玻璃作为酶载体的优势在于[11：①具有比表面积大(20—200mVg)；②微孔孔径可控制；③耐微生物性强；④耐酸碱性好；⑤在溶剂中不发生浸润、溶胀或收缩现象；⑥机械强度高；⑦耐热性好；⑧形状一定；⑨载体不会与载人的催化剂发生作用或产生副反应进而影响体系催化效果等。但由于酶工程与无机材料学科间的割裂使其作为酶载体的研究不充分。0／,一淀粉酶能使淀粉转化为麦芽糖，是使淀粉液化的酶，在发酵、制药、生物能源等方面应用广泛，是所有酶中消耗最大的酶。在工业中用自由酶，不仅用量大，成本高，而且产品色深质次，还要有精制设备，若用固定化酶，可以装柱，实现连续化生产，减少工艺环节，减少成本，无疑对固定0／,一淀粉酶的研究具有意义。本课题用分相法制作了载体多孔玻璃微珠FXBL(分相玻璃)，用物理吸附法、共价偶联法和重氮法分别固定0／,一淀粉酶，比较了它们的固定效果，选择共价偶联法进行多孔玻璃微珠的制作过程对0／,一淀粉酶的影响研究。共价偶联法固定化0／,一淀粉酶的最佳固定条件、最佳应用条件以及其性质将另文研究。2实验部分2．1多孔玻璃微珠的制作本实验以石英砂、硼酸、碳酸钠、白砒和硝酸钠为原料，熔制组成为(质量百分含量)si63．8％、B2027．8％、Na208．4％的玻璃，熔制温度制度见图1。将熔好的玻璃粉碎，用MgO作隔离剂，在马弗炉中加热至860~C，保温1h后取出，冷却，过筛除去MgO，将筛上物用水清洗干净，此筛上物即为玻璃微珠，再过筛和人工挑选得直径1．5mm左右的玻璃微珠为样品。室温(保时)坌(保温120l0小~C时)坌(保、时)图1多孑L玻璃的熔制温度制度用200mL去离子水、6mL的40％氢氟酸和4mL的98％的浓硫酸，配成溶液于25~C将玻璃微珠放人其中处理5min，干燥后，于580~C分相48h。将分相好的玻璃微珠用两步法进行处理成孔：第一步，于恒温95℃的水浴锅中浸泡24h；第二步，将玻璃微珠用0．3mol／L的盐酸于匣温95℃的水浴锅中浸泡72h。微珠用蒸馏水清洗三遍后，用0．5moUL的KOH溶液于30℃的水浴锅中处理2h，将微孔表面的硅胶膜去除，使孔扩大，清洗与烘干后即为多孔玻璃微珠FxBL。2-2固定化o【一淀粉酶的制备2．2．1吸附法固定化～淀粉酶的制备称取0．4g多孔玻璃FXBL，置于50mL三角烧瓶中，加入20mL的～淀粉酶溶液(酶活力17964U／L)，真空抽气lOmin，在10~C的水浴恒温振荡器中振荡吸附3h后，倒出残余酶液，用pH=6．0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓．冲液充分洗涤玻璃微珠后，真空干燥，即得固定化酶。收集残液和洗液用于测定残余活力。2．2．2偶联法固定化～淀粉酶的制备称取1g多孔玻璃FXBL，放人盛有一氨丙基三乙收稿日期：2007--09—30作者简介：王宝康(1964一)，男，高级讲师，湖南农业大学中职硕士在读研究生，研究方向：酶工程，13155250565，wbk102938@163．tom。维普资讯http://www.cqvip.com壬宝康：多孑L玻璃微珠的制作过程对固定0【一淀粉酶的影响．Ll。{fI}l}I摧溶液LI1【¨1流，制取烷基胺玻璃。然后，川n07l￡雌活化，用pH=7．0的磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲液允分洗涤至洗涤液中几伐二醛后真空干燥。称取0．25g已活化的烷基胺多孔玻璃FXBL，置于100mL三m烧瓶中，加入20mL的一淀粉酶溶液(酶活力17964U／L)，真空抽气10min，在10~C振荡15h，用pH=6．0的磷酸氢二...