cn基因时代,为生命科学提供源动力
基因时代,为生命科学提供源动力
改良改良LowryLowry氏法测定蛋白质含量氏法测定蛋白质含量TheLowryMethodforProteinQuantitationTheLowryMethodforProteinQuantitationwww
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目的与要求:目的与要求:掌握改良掌握改良LowryLowry氏法测定蛋白质含量的氏法测定蛋白质含量的原理及方法;原理及方法;了解标准曲线在物质定量测定中的应用了解标准曲线在物质定量测定中的应用及绘图要点
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实验原理实验原理::在碱性条件下蛋白质的肽键与在碱性条件下蛋白质的肽键与CuCu2+2+螯合,形成蛋白质螯合,形成蛋白质--铜复合物
(双缩脲铜复合物
(双缩脲反应反应BiuretReactionBiuretReaction))蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极蛋白质分子中带有酚基的酪氨酸极易使酚试剂中的磷钼酸易使酚试剂中的磷钼酸--磷钨酸还原,生磷钨酸还原,生成钼蓝成钼蓝--钨蓝蓝色化合物,蓝色深浅与蛋钨蓝蓝色化合物,蓝色深浅与蛋白质含量成正比
利用蓝色深浅与蛋白质白质含量成正比
利用蓝色深浅与蛋白质浓度成正比的关系可绘制标准曲线,测定浓度成正比的关系可绘制标准曲线,测定样品中蛋白质含量
(还原反应)样品中蛋白质含量
(还原反应)www
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试剂试剂(mL)(mL)试管号试管号001122334455测定管测定管蛋白质标准溶