2007年34(1)微生物学通报龙须菜体表附生细菌的几种分离方法比较徐永健乐观宗张友平(宁波大学生命科学与生物工程学院宁波31521)摘要：采用超声波粉碎法、涡旋振荡法、超声波清洗法、研磨匀浆法等4种不同的方法处理龙须菜，分离其体表的附生细菌，并对分离细菌的数量、种类、形态结构、细胞壁特性等进行了观察和分析。通过对不同方法和相同方法的不同处理所得结果比较显示，超声波清洗法和研磨匀浆法对分离细菌的数量和种类效果都较差；超声波粉碎法和涡旋振荡法效果较好，尤以超声波粉碎法的30W'30s处理效果最好，该方法分离到本项目4个方法13个处理获得的16个菌株中的12个菌株，龙须菜的细菌数1．75×10。cells／g。关键词：海藻，龙须菜，附生细菌，分离方法中图分类号：Q93文献标识码：A文章编号：0253-2654(2007)01-0123-04ComparisonwithSeveralMethodstoIsolateEpiphyticBacteriafromGracilarialemaneiformis(Rhodophyta)’XUYong-JianLEGuan—zongZHANGYou—PIng(FacultyofI_ifeScienceandBiotechnology，Ⅳi6oUniversity，Ningbo315211)Abstract：Weused4methods．suchasultrasoniccrush(UC)，ultrasonicrinse(UR)，whorl8urge(WS)andrubbing(RU)，toisolateepiphyticbacteriafromredalgaGrac／／ar／atemanaiform／s．Then，wecountedbacterianumbers，detectedbacterialspecies，observedbacterialconfigurationandcharacteristicofcellwal1．Comparedwiththesemethodsandwithdiferenttreatmentsinonemethod，theresultsweredrawn：theURandRUwereinferiorinallmethodstoisolatebacterialnumbersandspecies，theUCandWSwerebetter，especiany，thetreatment30W30sofUCWaSthebestinexperiment．whichisolated12of16bacterialspecies，andgot1．7510cellspergramwetweight&temane／form／s．Keywords：Seaweed．Grac／／ar／atemanefor~，Epiphyticbacmria，Isolationmethod藻类在生长过程中向环境释放大量的有机物质，使藻细胞周围形成一个独特的微环境，称为藻际微环境(Phycosphere)。在藻际微环境中，生活着大量的细菌，这些细菌具有独特的结构与功能，同藻细胞之间构成复杂的关系。如对藻体的附着和变态产生影响【】J，调控藻体分泌的物质【2；已发现的许多海洋活性物质是由海藻附生菌产生的，如抗生素、酶、色素等．4J，藻际微环境中的微生物是一个潜在丰富的资源库J。尽管已分离和鉴定了许多藻类的附生菌，揭示了两者之间一定的关系。但对藻际细菌的很多生态学意义仍然还没有研究清楚，在大多数情况下甚至连起作用菌株都没有分离到【6J。要研究这些附生细’宁波市博士基金项目(No．2005A610025)宁波市科技项目(No．2004610028)宁波市自然科学基金项目(No．2006A610087)通讯作者Tel：86-574-87600374．E．mail：xuyongjian@nbu．edu．cn收稿日期：2006-03．10。修回日期：2006-05．10菌的相关性质和作用以及细菌与海藻之间的复杂关系，首先要找到一种能够有效的从海藻表面分离附生微生物的方法。目前国内关于藻类表面附生细菌的分离方法的报道还很少，在实验中涉及到附生微生物分离的仪器和方法也不尽一致。本实验采用4种不同的仪器，设置了系列分离方法对龙须菜(Grac／／ar／a／emane／form／s)体表附生细菌进行了分离和鉴定，试图寻找出一种有效的分离方法，为以后类似研究提供一些参考和依据。1材料与方法1．1试验材料实验用龙须菜(G．／emane／form／s)采自宁波象维普资讯http://www.cqvip.com·124·微生物学通报山港内的养殖筏架，带回实验室后，冲洗干净，去除杂藻，暂养在室用100L塑料大桶中，暂养条件为：60W荧光灯作光源，光周期12L：12D，添加营养盐20~mol(N)／L、2~mol(P)／L，每天早晚搅拌2次。实验中，用于分离微生物的培养基为Zobell2216E海水培养基。实验采用的主要分离仪器有：超声波粉碎机JY96-II型(宁波科生仪器厂)，旋涡振荡仪QL．861(江苏海门市麒麟医用仪器厂)，超声波清洗CQ25-12D(宁波新艺生物科技股份有限公司)，石英砂和匀浆研钵。1．2分离方法取暂养龙须菜约0．2g，用灭菌纱布吸干藻体表面水分，电子天平准确定量，记录各处理的藻体重量。...
