2.2.1动物细胞培养和核移植技术思考:2.但对一个大面积烧伤的病人来说,自体健康皮肤非常有限,怎样才能获得大量的自体健康皮肤呢?1.在治疗烧伤病人，通常采用什么样的办法?一、动物细胞培养动物细胞培养：从动物机体中取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和繁殖。原理：细胞增殖动物胚胎或幼龄动物的组织、器官（取材）细胞悬液10代细胞50代细胞传代培养无限传代单个细胞加培养液原代培养细胞株细胞系遗传物质未改变遗传物质已改变（一）动物细胞培养过程：1.选择什么样的材料进行培养？思考：动物胚胎或幼龄动物的组织、器官。胰蛋白酶或胶原蛋白酶；蛋白质；不行，胃蛋白酶最适PH为2.0，细胞培养液PH为7.2-7.4，胃蛋白酶失活。3.这两种酶会不会把细胞消化掉？2.用什么酶把组织分成单个？说明细胞间的物质主要是什么成分？用胃蛋白酶行不行？处理时间过长，胰蛋白酶会消化细胞膜蛋白，造成细胞损伤。4.培养过程中动物细胞的生长有什么特点？5.什么是原代培养、什么是传代培养？6.培养得到的细胞，如果暂时不用时，怎么保存？选择第几代的细胞进行保存？细胞贴壁；细胞的接触抑制。原代培养：分装之前，10代以内的细胞。传代培养：分装后继续培养，10代以后的细胞。冷冻保存；10代以内，能保持正常的二倍体核型讨论1.体外培养细胞时需要提供哪些物质？2.体外培养的细胞需要什么样的环境条件？（二）动物细胞培养的条件1)无菌、无毒的环境：①对培养液和所有培养用具进行无菌处理；②通常在培养液中添加一定量的抗生素；③定期更换培养液。2)营养：①合成培养基糖、氨基酸、促生长因子、无机盐、微量元素等。②常加入血清、血浆等天然成分。3)温度和pH：①温度：哺乳动物多以36.5±0.5℃为宜。②pH：7.2—7.4。4)气体环境：95%O2和5%CO2。获得细胞或细胞产物细胞的全能性细胞数目增多一般为植物体培养结果快速繁殖、培育脱毒作物等培养目的葡萄糖、动物血清蔗糖、植物激素培养基特有成分液体培养基固体培养基培养基性质细胞增殖原理动物细胞培养植物组织培养比较项目植物细胞和动物细胞培养的比较•生物制品：病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体。•基因工程的受体细胞。•检测有毒物质，判断某种物质的毒性。•用于生理、病理、药理等研究：筛选抗癌药物。（三）动物细胞培养技术的应用思考：离体的植物组织或细胞在适当的培养条件下可以发育成完整的植株，动物细胞培养能否像绿色植物组织培养那样最终培养成新个体？二.动物细胞核移植技术和克隆动物动物核移植：将动物的一个细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成为一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育为动物个体（克隆动物）分类胚胎细胞核移植（易）体细胞核移植（难）卵细胞母绵羊C子宫母绵羊Ａ母绵羊Ｂ乳腺细胞细胞质细胞核早期胚胎多莉羊融合后的卵细胞（一）体细胞核移植技术克隆羊多莉的培育过程体细胞培养甲牛乙牛MⅡ卵母细胞去核去核卵母细胞重组卵细胞核植入卵裂早期胚胎代孕母牛丙移植体细胞群克隆牛细胞核移植胚胎移植物理或化学方法激活显微操作法克隆高产奶牛的培育过程•整个过程用了哪些技术？细胞培养、核移植、胚胎移植•新生牛的性别、基因？与供体相同，基因与供体的基本相同•繁殖方式？无性繁殖•原理？动物细胞核的全能性思考：1.为什么要选择MII卵母细胞作为受体细胞？细胞大，易操作；卵黄多，营养丰富，为发育提供充足的营养。细胞质中存在重组因子，促进重组细胞的分裂和分化，形成重组胚胎。讨论：2.在体细胞的细胞核移植到受体卵母细胞之前，为什么必须先去掉受体卵母细胞的核？使核移植的胚胎或动物的遗传物质全部来自有重要利用价值的动物提供的体细胞。3.说出与克隆“多莉”的不同之处。为什么没有取出细胞核？移植细胞不是细胞核，可防止显微操作造成细胞核结构受损。4.产生的犊牛与供体奶牛性状存在一定差异，这是为什么？生物的性状由细胞核和细胞质共同控制；生物的性状还受环境因素影响。5.促进细胞融合的方法：①物理方法：电脉冲等。②化学方法：钙离子载体、乙醇、蛋白酶合成抑制剂等。（二）体细胞核移植技术的应用前景1....
