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国际眼科纵览2006年2月第30卷第I期IntRevOphthalmol,February2006,Vol30,No.I·综述·印4亦匆晌燎杏件六眼丰惊痛价中的命田日J卫尘圳万}}-了六j土目民}M大夕内侈圳!甲rl}力竺川李学民王薇[摘要」印迹细胞法是近年来在临床上应用的一种简单、微创的眼表取材技术，该技术通过特殊的方式获取眼球表面的细胞样本，进行各种病理染色，帮助诊断眼表疾病。该技术不但可以对结膜鳞状上皮化生进行分期，而且可以对眼表复层鳞状__匕皮新生物、干眼症、角巩膜缘干细胞缺乏、眼表病毒感染、维生素A缺乏症、眼表过敏性炎症、结膜色素痣和结膜恶性黑色素瘤等眼表疾病进行辅助诊断。本文对印迹细胞法的技术特点及其在眼科中的应用进行综述。【关键词】眼表疾病/诊断;印迹细胞法印迹细胞法是临床上一种简单、微创的眼表取材技术，该技术通过特殊的方式获取眼球表面的细胞样本，进行各种病理染色，帮助诊断眼表疾病。该技术的早期，主要用于眼表复层鳞状上皮新生物和干眼症的诊断[t,2?。目前印迹细胞除可以对结膜鳞状上皮化生进行分期，用于帮助诊断眼表复层鳞状上皮新生物和干眼症以外，还可以对角巩膜缘干细胞缺乏、眼表病毒感染、维生素A缺乏症、眼表过敏性炎症、结膜色素痣和结膜恶性黑色素瘤等眼表疾病进行辅助诊断，并可以对局部使用药物如丝裂霉素C(mitomycinC,MMC)引发的眼表新生物进行随访观察。一、印迹细胞检查法的发展早在1954年法国人Larmande和Timsitl'j就首次使用印迹细胞法对眼表复层鳞状上皮新生物进行诊断。1977年Egbert等[2丁首次使用醋酸纤维滤纸对干眼症患者取样进行印迹细胞法检查，自然风干后行PAS染色，了解患者结膜杯状细胞的密度。这种取样方法患者一般没有痛苦，甚至可以不用麻醉。醋酸纤维滤纸取样一般可以得到角膜和结膜表面的1一3层细胞131。1992年以前，大多数印迹细胞检查都是使用各种特殊处理的醋酸纤维滤纸，使用各种容器送到实验室进行病理染色。随着印迹细胞检查法的发展，人们对此方法进行了许多改良。如Simon等〔‘〕采用一种新型生物膜代替醋酸纤维滤纸收集眼表细胞进行眼表疾病的诊断。这种新型生物膜是由生物膜和圆筒型支架组成，性能稳定，豁附力强，可以直接在作者单位:100083北京大学眼科中心北京大学第三医院眼科眼球表面取样。并且这种生物膜在潮湿的情况下是透明的，更利于进行细胞学检查。二、印迹细胞检查法的技术(1)材料的选择:印迹细胞是一种取样的方法，所使用的材料可以选择目前国际上广泛使用的生物膜和各种特殊处理的滤纸。(2)取样准备:在进行印迹细胞检查之前，取样用的生物膜和各种特殊处理的滤纸都需要经过无菌处理。麻醉:取样前用普鲁卡因、丁卡因或利多卡因等麻醉剂对患眼进行表面麻醉。(3)取样方法:将取样用的生物膜或各种特殊处理的滤纸的豁附面紧紧贴附于取样处的眼球表面，直到生物膜变为半透明或滤纸变得潮湿为止。这一过程大约需要10-20秒。(4)标本的保存和处理:取下的潮湿的生物膜或滤纸需即刻放入95%酒精中固定，勿将生物膜自然风干。固定后将标本送到实验室，进行各种处理及染色。也可以采取其他特殊的处理方法，如将滤纸的取样一面紧压在镀胶的载玻片上[sl或将滤纸的取样一面紧压在普通的载玻片上，再将二者一起放人甲醇、乙醇或丙酮中浸泡处理[6]。然后再对处理过的载玻片进行各种染色。(5)染色方法:所取的样本可以进行H-E,PAS、免疫组化和免疫荧光等各种染色。对干眼症患者进行杯状细胞检查的最佳方式是PAS染色。(6)观察方法:染色后用显微镜观察，对于使用不透明滤纸取得的样本，可以通过显微镜直接观察或对样本进行特殊处理后再进行观察。三、印迹细胞检查法的新进展目前印迹细胞检查法采用很多新技术，如免疫组化染色对采集的标本进行检查，如对各种抗原的检查，包括病毒抗原和凋亡的检查。同时，印迹细胞国际眼科纵览2006年2月第30卷第1期IntRevOphthalmol,February2006,Vol30,No.1还被应用于流式细胞学、免疫荧光学等多种检查。(1)共聚焦显微镜:Pisella等[71在球结膜印迹细胞取材的玻片上使用免疫荧光标记的抗体标记结膜的豁蛋白，通过共聚焦显微镜观察发现豁蛋白存在于杯状细胞的微小囊泡中。(2)流式细胞学:Baudouin...