应用多重PCR检测冷冻虾类海产品中3种致病菌VIP免费

多重PCR快速检测水产品中3种食源性致病菌方法的建立夏慧丽1*郑辉台州市质量技术监督检测研究院浙江台州318000摘要：本文基于沙门氏菌(Salmonellatypli，St)侵袭性抗原保守基因invA、副溶血性弧菌(Vibrioparahaemolyticus,Vp)目的基因irgB和单核细胞增生李斯特菌(Listeriamonocytogenes,Lm)调控蛋白基因prfA，设计了3对特异性引物，建立了快速检测水产品中3种主要食源性致病菌的多重PCR方法。结果显示，沙门氏菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特菌的多重PCR扩增片段产物大小分别为213、369和517bp。反应条件优化后，3种目的菌在103CFU/mL均可同时扩增出较清晰条带，彼此之间无交叉反应，具有良好的特异性和灵敏度。该方法应用于3份人工污染水产样品的检测，并与国标方法对比验证，3种致病菌的整体符合率均达100%。该方法操作简单，检测周期短，灵敏度高、特异性强，能够实现对水产品中沙门氏菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特菌3种食源性致病菌的快速诊断检测和监控。关键词：多重PCR；沙门氏菌；副溶血性弧菌；单核细胞增生李斯特菌；水产品Establishmentofmultiple-PCRfordiagnosingthreefoodbornepathogenicbacteriainaquaticproductsXiaHui-liZhengHuiResearchInstituteofQuality&TechnicalSupervisionandInspection,Taizhou,Zhejiang,318000,ChinaAbstract:Arapidmultiplex-PCRmethodwasestablishedinordertodetectthreefoodbornepathogenicbacteriaincludingSalmonellatypli，VibrioparahaemolyticusandListeriamonocytogenesinaquaticproducts.Threepairsofoligonucleotideprimersweredesignedformultiplex-PCRamplificationaccordingtogenecodinginvasionproteinAofSalmonellatypli，genecodingimmuneresponseofVibrioparahaemolyticusandregulationhistonegeneofListeriamonocytogenes.geneofShigellaspp．Theamplifiedfragmentsizesofthesethreebacteriawere*基金项目：浙江省质监系统科研计划项目（20090237）*第一作者简介：夏慧丽（1978-），女（汉），高级工程师，博士，研究方向：食品质量检测与分析。联系电话：0576-88320885；E-mail：huili2001@163.com。1213bp,369bpand517bp,respectively．Undertheoptimizedconditions,thespecificityofthemultiplex-PCRwashigh,andtheminimumdetectionlimitwas103CFU/mL.Themultiplex-PCRmethodwasusedtoanalyzethreeaquaticproductsamplescomparedwithnationalstandardmethods,thecoincidencerateoftwomethodsreached100%.Themethoddevelopedinthisstudyhadhighsensitivityandspecificity,whichcouldbeappliedfortherapiddetectionandmolecularepidemiologysurveyoffoodbornepathogenicbacteriainaquaticproducts．Keywords:Mmultiple-PCR,Salmonellatypli,Vibrioparahaemolyticus,Listeriamonocytogenes,Aquaticproducts0引言近几年我国水产品消费量不断上升，而水产品在养殖、捕捞、储藏、加工、运输、销售等环节容易受到病原微生物的污染[1]，因此病原微生物检测是水产品及其加工品卫生检测中的一项重要工作，关系到消费者的健康及生命安全。其中沙门氏菌、副溶血性弧菌、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特菌认为是重要的污染水产品的致病菌[2-4]，他们广泛分布在河口、海水及沉积物、水产养殖区域，寄生在海洋生物体中[5]，通过污染的动物源性食品感染人类。世界各国已将食源性致病菌的检测列为重要的卫生检出指标之一。常规检测这些致病菌需要分离培养、生化试验和血清学试验等多个步骤，检测周期长、操作繁琐、灵敏度低，而且每次只能检测出一种致病菌。面对食品中污染病原菌种类的日益增加，目前的实验室检测方法明显滞后。随着分子生物学检测技术的发展，尤其是在常规PCR[6-8]基础上发展起来的多重PCR检测技术，使同时检测多种病原微生物成为可能，该技术具有高效、高产、低成本、速度快等优点，有较好的可操作性，目前已在多种病原微生物的检测中得到初步应用[9-15]。在现有研究工作的基础上，本研究旨在建立同时针对海产品中沙门氏菌、副溶血性弧菌和单核细胞增生李斯特菌三重PCR检测方法，以期指导生产...