第21卷第6期2002年11月无锡轻工大学学报JournalofWuxiUniversityofLightIndustryVol.21No.6Nov.2002文章编号:1009-038X(2002)06-0597-05收稿日期:2002-05-20;修订日期:2002-09-07.作者简介:赵建新(1971-),男,河南三门峡人,工学硕士,工程师.丁酸菌的分离、鉴定及筛选赵建新,张灏,田丰伟(江南大学食品学院,江苏无锡214036)摘要:从32位健康人的粪便中分离到4株丁酸梭状芽孢杆菌,其中丁酸梭状芽孢杆菌Z-10产酸和细胞生长速度最快.对其安全性评价为基本无毒,并进行了鉴定.关键词:丁酸梭状芽孢杆菌;分离;鉴定;筛选中图分类号:Q93-331文献标识码:AIsolation,IdentificationandSelectionofClostridiumbutyricumZHAOJian-xin,ZHANGHao,TIANFeng-wei(SchoolofFoodScienceandTechnology,SouthernYangtzeUniversity,Wuxi214036,China)Abstract:FourstrainsofClostridiumbutyricumwereisolatedfromfecesof32normalindividuals,a-mongwhichstrainZ-10showedthehighestspeedofacid-producingandcellgrowth.ThetoxicologicalanalysisshowedClostridiumbutyricumZ-10wasbasicallynonpoisonous.Keywords:C.butyricum;Isolation;Identification;Selection丁酸梭状芽孢杆菌(Clostridiumbutyricum)又名酪酸菌,主要存在于奶酪、天然酸奶、人与动物粪便、某些树叶、土壤等自然环境中,一般在10%~20%健康人群中能分离得到[1].丁酸梭状芽孢杆菌作为微生态制剂来研究,是1933年由日本千叶医科大学宫入近治首先发现并报告,因此又名宫入菌[2].其作为微生态制剂的药理机制至今还没有得到清楚的解释[3].丁酸梭状芽孢杆菌活菌制剂经日本学者的大量研究证明,主要在大肠和盲肠周边增殖,目前广泛应用于消化、小儿、外科、肿瘤、妇产科等种种原因引起的肠道菌群失调,急慢性腹泻,肠易激综合症,抗生素相关性肠炎,便秘或腹泻便秘交替症等疾病的治疗[4,5,6].作为微生态制剂有如下特点:(1)促进肠道内有益菌群的增殖和发育,抑制肠道内有害菌和腐败菌的生长繁殖,减少胺类、吲哚类物质的产生[7];(2)在肠道内产生维生素B族、维生素K、淀粉酶,有良好的保健作用;(3)代谢物丁酸是肠上皮组织细胞再生和修复的主要营养物质;(4)对多种抗生素有较强的耐受性,与抗生素并用时不会影响其生物作用,并能大幅度降低伪膜性肠炎的发病率[8];(5)在人体内不受胃酸、消化酶、胆汁酸等影响.作者从健康人群粪便中分离筛选出生长性状较优良的丁酸梭状芽孢杆菌,并进行了菌种鉴定.为丁酸梭状芽孢杆菌的进一步应用提供了理论依据.1材料与方法1.1实验材料1.1.1样品采集选择不同健康人群的粪便作为样品来源.1.1.2培养基梭菌增殖培养基(均为质量浓度g/dL):胰蛋白胨2,牛肉浸膏1,酵母膏0.6,葡萄糖0.4,牛胆酸盐0.5,复合盐1份(K2HPO40.2、KH2PO40.1、MgSO40.04、CaCl20.02、FeSO40.01、盐酸半胱氨酸0.05,以下同);pH7.2,121e,15min杀菌.梭菌计数培养基(均为质量浓度g/dL):胰蛋白胨1,牛肉浸膏0.5,酵母膏0.3,葡萄糖0.4,琼脂1.6;复合盐1份;pH7.2,15min杀菌.梭菌分离培养基:在增殖培养基中加入:牛胆酸盐0.5g/dL,琼脂1.6g/dL;调pH到7.2,15min杀菌.梭菌培养基:在梭菌增殖培养基中减掉牛胆酸盐,其它成分不变,pH依试验需要用NaOH调节,15min杀菌.产酸指示培养基:在梭菌培养基中加入3mL质量浓度为0.4g/dL的溴甲酚紫.明胶液化培养基:在梭菌培养基中加入1.2g/dL的明胶即可.无碳基础培养基(均为质量浓度g/dL):酵母膏0.1,(NH4)SO40.2,碳源另加0.5;复合盐1份.1.2实验方法1.2.1分离方法1)取粪便样品10g加到90mL稀释液中,放入80e水浴10min,杀死非芽孢菌,然后放入增殖培养基,于31e培养36h.2)将样品分别稀释到10-3、10-5、10-7,涂布于梭菌分离培养基,放入厌氧罐中,置换3次气体(体积分数分别为10%的H2、10%CO2和80%N2),并用铂粒作为催化剂,在0.01MPa的气体压力下37e厌氧培养[9]36~48h.3)采用影印平板法分离菌种[10],分别进行好氧和厌氧培养,选取厌氧生长良好的菌株,镜检.1.2.2属及群的初步鉴定:按5伯杰氏细菌鉴定手册6[3]和5细菌属的鉴定指导6[11]对分离到的纯菌株进行属的相关试验,以及群、种的相关生理生化实验,分别包括:明胶液化试验,蜜二糖、松三糖、淀粉水解试验.1.2.3菌种的产酸及...
