课题1-DNA的粗提取与鉴定VIP免费

DNA的粗提取与鉴定基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在________和____________方面的差异，提取DNA，去除其他成分1一DNA提取的原理DNA的溶解性DNA的耐受性物理化学性质（一）DNA的溶解性：1一DNA提取的原理溶解度NaCl浓度00.14mol/L________mol/LNaCl溶液中，DNA的溶解度最低0.14低盐溶液中，蛋白质溶解度高；高盐溶液中，蛋白质溶解度低盐析（一）DNA的溶解性：1一DNA提取的原理在盐溶液（NaCl）中的溶解度：DNA：0.14mol/LNaCl溶液中溶解度最低蛋白质：低盐溶液中，溶解度高；高盐溶液中，溶解度低。在酒精中的溶解度：DNA：不溶于酒精蛋白质：溶于酒精1一DNA提取的原理DNA的溶解性DNA的耐受性基本思路：利用DNA与RNA、蛋白质和脂质等在________和____________方面的差异，提取DNA，去除其他成分物理化学性质（二）DNA的耐受性：1一DNA提取的原理项目DNA蛋白质蛋白酶高温洗涤剂没影响水解80℃以上才会变性60～80℃就变性不可逆可逆蛋白质洗涤剂细胞膜（二）DNA的耐受性：1一DNA提取的原理项目DNA蛋白质蛋白酶高温洗涤剂没影响水解80℃以上才会变性60～80℃就变性瓦解细胞膜没影响（三）DNA的鉴定：1一DNA提取的原理二苯胺：DNA+二苯胺甲基绿：DNA+甲基绿→绿色蓝色沸水浴判断：染色剂二苯胺可用甲基绿染色剂代替错（一）实验材料的选取选用DNA含量相对较高的生物组织，成功的可能性大1二实验过程讨论：能否选用猪、牛、羊血做实验材料？不能，因为哺乳动物成熟的红细胞中无细胞核•动物：鱼卵、猪肝、鸡血•植物：菜花、香蕉、猕猴桃、洋葱、豌豆、菠菜（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液动物细胞的破碎：1二实验过程吸水胀破用鸡血细胞液，而不用鸡全血的原因？①鸡血+柠檬酸钠②玻璃棒搅拌③离心/静置后_______上清液（抗凝剂）注意：1.以血液为实验材料时，要加入柠檬酸钠，防止血液凝固2.应沿一个方向搅拌，动作轻缓，以防DNA断裂离心/静置除去3.最好用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液（二）破碎细胞，获取含DNA的滤液1二实验过程植物细胞的破碎：动物细胞的破碎：吸水胀破洗涤剂+食盐在鸡血细胞液中加入一定量的_________，同时用_________搅拌，使血细胞的细胞膜和核膜___________，过滤后收集滤液蒸馏水玻璃棒吸水胀破在切碎的洋葱中加入一定量的_______________，进行充分地搅拌和________，过滤后收集研磨液洗涤剂和食盐研磨溶解细胞膜溶解DNA讨论：如果研磨不充分，会对实验结果产生怎样的影响？（三）去除滤液中的杂质1二实验过程方案一：DNA的溶解性①溶解核内DNA2mol/L的NaCl溶液+滤液→搅拌后过滤②析出DNA上述滤液+蒸馏水→搅拌至丝状物max→过滤③丝状物再溶解稀释NaClNaCl：0.14mol/L丝状物+2mol/L的NaCl→搅拌溶解→过滤讨论：为什么反复地溶解与析出DNA，能够去除杂质？（三）去除滤液中的杂质1二实验过程方案二：DNA对蛋白酶的耐受性直接在滤液中加入嫩肉粉，反应10~15min，嫩肉粉中的木瓜蛋白酶能够分解蛋白质。方案三：DNA对高温的耐受性将滤液放在60~70℃的恒温水浴箱中保温10~15min，注意严格控制温度范围。（四）DNA的析出与鉴定1二实验过程滤液+与滤液体积相等的、冷却的酒精溶液→搅拌→白色丝状物析出的DNADNA的析出：DNA的鉴定：实验组对照组2mol/LNaCl白色丝状物二苯胺，沸水浴颜色变化蓝色不变蓝实验结果不明显，可能是什么原因？讨论①实验材料中DNA含量低②在使用玻璃棒搅拌的过程中，用力过猛或不够充分③二苯胺配制时间过长④析出含DNA的粘稠物中，蒸馏水一次加入过多最好使用塑料的烧杯和试管盛放鸡血细胞液注意事项：3.加入洗涤剂后，动作要轻缓，否则容易产生大量泡沫4.加入酒精和用玻璃棒搅拌时，动作用轻缓，以免加剧DNA分子断裂，导致DNA分子不能形成絮状沉淀5.二苯胺试剂要现配现用，否则会影响鉴定的效果1.一定要选取DNA含量较高的生物材料2.以血液为实验材料时，需加入柠檬酸钠，防止血液凝固③DNA和蛋白质对酶、高温、洗涤剂的耐受性不同小结④DNA与二苯胺呈现蓝色反应2.DNA粗提取：①选材1.实验原理：①DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同②破碎细胞③DNA的溶解和析出④DNA的纯化3.DNA的...