•专题五DNA和蛋白质技术•专题六植物有效成分的提取•知识排查•考点诠解•一、DNA的粗提取与鉴定•1．基本原理•(1)DNA在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同，在0.14mol/L的NaCl溶液中的溶解度最低；•(2)DNA不溶于酒精溶液；•(3)DNA不被蛋白酶所水解；•(4)DNA可被二苯胺染成蓝色。•2．方法目的方法目的溶于NaCl溶液中并稀释①NaCl浓度为2mol/L时，DNA溶解，而部分蛋白质发生盐析而生成沉淀，通过过滤可除去部分蛋白质及不溶于NaCl溶液的杂质②当NaCl溶液稀释至0.14mol/L时，DNA析出，过滤可除去溶于NaCl中的部分蛋白质和其他杂质方法目的加入嫩肉粉嫩肉粉中含木瓜蛋白酶，水解蛋白质加入冷却酒精(95%)DNA析出，除去溶于酒精的蛋白质加入二苯胺，并沸水浴鉴定DNA•特点提醒：①哺乳动物成熟的红细胞中不含细胞核，也没有DNA，不适于作DNA提取的材料，但却是提取血红蛋白的理想材料。•②实验过程中两次用到蒸馏水，第一次目的是使成熟的鸡血细胞涨破释放出DNA；第二次目的是稀释NaCl溶液。•二、多聚酶链式反应(PCR)扩增DNA片段•1．实验原理•DNA分子复制。•2．实验材料•引物、PCR仪(自动调控温度)、TaqDNA聚合酶、DNA模板、原料(四种脱氧核苷酸)。•(1)模板DNA的变性：模板DNA经加热至94℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。•(2)模板DNA与引物的复性：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。•(3)引物的延伸：DNA—模板引物结合物在TaqDNA聚合酶的作用下，以4种脱氧核苷酸为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原则，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。•——重复循环变性复性延伸过程，就可获得更多的半保留复制链，而且这种新链又成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4min,2～3h就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。其具体实验操作步骤如下：•(1)按照PCR反应体系的配方将所需试剂摆放在实验桌上；•(2)用微量移液器按照配方在微量试管中依次加入各组分；•(3)盖严离心管口的盖子，用手指轻轻弹击管壁；•(4)将微量离心管放在离心机上，离心约10s。•(5)将离心管放入PCR仪上，设置好PCR仪的循环程序。以上过程可概括为准备、移液、混合、离心、反应五步。•特别提示：体内复制PCR反应时期细胞有丝分裂间期或减数第一次分裂间期体外随时进行场所细胞内微量离心管内解旋在解旋酶作用下，细胞提供能量，部分解开加热至90℃，双链全部解开，不需解旋酶引物一小段RNA可以是RNA或单链DNA分子片段合成子链在引物基础上，一条链连续合成，另一条链不连续合成分别从两条链的引物端开始，都是连续合成，控制温度72℃特点边解旋边复制，半保留复制体外迅速扩增TaqDNA聚合酶不需要需要循环次数受生物体自身控制30多次相同点生物体内的DNA和PCR体外DNA扩增都需要模板、四种脱氧核苷酸，且都需要在一定的缓冲溶液中进行•三、血红蛋白的提取和分离•1．方法及原理方法原理凝胶色谱法根据相对分子质量的大小分离蛋白质电泳法各种分子带电性质的差异以及分子本身大小、形状的不同•2.实验操作程序•(1)样品处理：•①红细胞的洗涤：除去血浆蛋白等杂质，有利于后续步骤的分离纯化；•②血红蛋白的释放：使红细胞涨破，血红蛋白释放出来；•③分离血红蛋白溶液：经过离心使血红蛋白和其他杂质分离开来，便于下一步对血红蛋白的纯化。•(2)——粗分离透析：除去样品中相对分子质量较小的杂质。•(3)纯化：一般采用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离和纯化。•(4)纯度鉴定：一般用SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法，来测定蛋白质的相对分子质量，即对血红蛋白进行纯度鉴定。•四、植物芳香油的基本知识•1．植物芳香油的基本知识•(1)成分：组成较复杂主要包括萜类化合物及其衍生物。•(2)特点：具有很强的挥发性，易溶于有机溶剂。•(3)应用：玫瑰精油是制作高级香水的主要成分，能使人产生愉快感；橘皮精油的主要成分是柠檬烯，具有诱人的橘香味，是食品、化妆品和香水配料的优质原料。2．玫瑰精油的提取流程鲜玫瑰花＋清水―→水蒸...
