二轮专题复习——PCR技术1.Bcl2基因是细胞凋亡抑制基因，可以利用PCR技术检测其转录水平，进而了解该基因与不同胚胎时期细胞凋亡的关系。下图为克隆猪的培育及Bcl2基因转录水平检测流程，下列说法错误的是()A．图中甲细胞表示去核的卵母细胞，乙细胞表示体细胞B．在早期胚胎发育的不同时期提取的总mRNA是不同的C．图中过程X表示逆转录，获得的cDNA可用于克隆猪基因组的测序D．在PCR过程中，Bcl2cDNA与cDNA的比值可反映Bcl2基因的转录水平2.(2017·江苏高考)金属硫蛋白(MT)是一类广泛存在的金属结合蛋白，某研究小组计划通过多聚酶链式反应(PCR)扩增获得目的基因，构建转基因工程菌，用于重金属废水的净化处理。PCR扩增过程示意图如下，请回答下列问题：(1)从高表达MT蛋白的生物组织中提取mRNA，通过________获得________用于PCR扩增。(2)设计一对与MT基因两端序列互补配对的引物(引物1和引物2)，为方便构建重组质粒，在引物中需要增加适当的________________位点。设计引物时需要避免引物之间形成________________，而造成引物自连。(3)图中步骤1代表________，步骤2代表退火，步骤3代表延伸，这三个步骤组成一轮循环。(4)PCR扩增时，退火温度的设定是成败的关键。退火温度过高会破坏________________的碱基配对。退火温度的设定与引物长度、碱基组成有关，长度相同但________的引物需要设定更高的退火温度。(5)如果PCR反应得不到任何扩增产物，则可以采取的改进措施有________(填序号：①升高退火温度②降低退火温度③重新设计引物)。答案：(1)逆转录cDNA(2)限制性核酸内切酶碱基互补配对(3)变性(4)引物与模板GC含量高(5)②③3.RTPCR是将RNA逆转录(RT)和cDNA的聚合酶链式扩增反应相结合的技术，具体过程如图所示：(1)过程Ⅰ需要加入缓冲液、原料、_____________________________________________、______________和引物A等。(2)过程Ⅱ首先要将反应体系的温度升高到95℃，其目的是________________________________________________________________________，该反应体系中所用的Taq酶至少应能耐受__________℃高温。(3)过程Ⅱ拟对单链cDNA进行n次循环的扩增，理论上至少需要________个引物B。(4)利用RTPCR技术获取的目的基因______________(填“能”或“不能”)在物种之间交流；该技术还可用于对某些微量RNA病毒的检测，可提高检测的灵敏度，原因是________________________________________________________________________。(5)RTPCR过程中主要借助对________的控制，影响酶的活性，从而使得化学反应有序高效地进行。答案：(1)RNA提取物逆转录酶(2)让逆转录酶变性失活、使mRNAcDNA杂合双链解开(答出一点即可)95(3)2n－1(4)能增加了待测RNA逆转录产生的DNA的数量(或浓度)，便于检测(5)温度
