PCR技术的原理及应用VIP免费

精选2021版课件1PCR技术的原理及应用精选2021版课件2PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’解旋酶解链酶DNA解旋解链合成引物子链延长精选2021版课件3PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘引物酶引物酶RNA引物RNA引物精选2021版课件4PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明ATCGCGATAGCGTAGCTGCGACCTAGC5’3’TAGCGCTATCGCATCGACGCTGGATCG3’5’DNA解旋解链合成引物子链延长GGAUCG5‘AUCGCG5‘TAGCGCTATCGCATCGACGCT3’ATAGCGTAGCTGCGAGGATCG3’DNA聚合酶DNA聚合酶精选2021版课件5PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明1971年，Khorana提出：经过DNA变性，与合适引物杂交，用DNA聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可克隆tRNA基因。但由于测序和引物合成的困难，以及70年代基因工程技术的发明使克隆基因成为可能，所以，Khorana的设想被人们遗忘了……精选2021版课件6PCR技术简史•DNA的复制•核酸体外扩增的设想•聚合酶链反应的发明1985年，美国PE-Cetus公司的Mullis等人发明了聚合酶链反应（PCR）基本原理是在试管中模拟细胞内的DNA复制最初采用E-coliDNA聚合酶进行PCR，由于该酶不耐热，使这一过程耗时，费力，且易出错耐热DNA聚合酶的应用使得PCR能高效率的进行，随后PE-Cetus公司推出了第一台PCR自动化热循环仪1993年，Mullis等因此项技术获诺贝尔化学奖精选2021版课件7KaryB.KaryB.MullisMullis<>Reaction>>19891989年美国《年美国《ScienceScience》杂志列》杂志列PCRPCR为为十余项重大科学发明之首十余项重大科学发明之首,,比喻比喻19891989年为年为PCRPCR爆炸年爆炸年,Mullis,Mullis荣获荣获19931993年度诺贝尔化年度诺贝尔化学奖。学奖。精选2021版课件8生物样品生物样品DNADNA片段片段基因诊断基因诊断基因治疗基因治疗基因工程产品基因工程产品法医学检测法医学检测人类学研究人类学研究…………精选2021版课件9基因组基因组DNADNA获取特定获取特定DNADNA片段片段扩增特定扩增特定DNADNA片段片段精选2021版课件10DNADNA聚合酶聚合酶引物引物引物引物M13M13噬菌体噬菌体SangerSanger的测序技的测序技术术引物DNADNA聚合酶聚合酶精选2021版课件11引物引物MullisMullis的构思的构思DNADNA聚合酶聚合酶DNADNA聚合酶聚合酶特定特定DNADNA片段片段精选2021版课件129494℃变性变性50-65℃50-65℃退退火火XX℃延伸延伸精选2021版课件139494℃55℃55℃37℃37℃精选2021版课件14TaqTaqDNA聚合酶（thermusaquaticus)酶活性酶活性(%)(%)温度温度(℃)40506070809010010080604020精选2021版课件1572℃72℃9494℃55℃55℃PCRPCR循环循环精选2021版课件16PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点标准的PCR反应体系4种dNTP混合物各200umol/L引物各10～100pmol模板DNA0.1～2ugTaqDNA聚合酶2.5uMg2+1.5mmol/L精选2021版课件171234522557294时间（min）温度（℃）PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性DNA变性形成2条单链子链延伸DNA加倍精选2021版课件18PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点1234522557294时间（min）温度（℃）适温延伸3高温变性1低温退火2重复1~3步25~30轮目的DNA片段扩增100万倍以上DNA双螺旋DNA单链与引物复性子链延伸DNA加倍DNA变性形成2条单链模板DNA95℃精选2021版课件19PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点95℃50℃引物1引物2DNA引物精选2021版课件20PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点50℃引物1引物2DNA引物72℃Taq酶Taq酶精选2021版课件21PCR的基本原理•PCR反应条件•PCR过程•PCR的特点72℃第1轮结束95℃第2...