实验二：神经--肌肉标本的制备与骨骼肌收缩[实验内容]1．坐骨神经—排肠肌标本的制备2．刺激强度与骨骼肌收缩反应的关系3．骨骼肌单收缩的分析4．骨骼肌收缩的总和与强直收缩[目的要求]1．学习蛙类动物单毁髓与双毁髓的方法。2．学习并掌握蛙类坐骨神经－排肠肌标本的制备方法。3．学习肌肉实验的电刺激方法及肌肉收缩的记录方法。4．观察刺激强度与肌肉收缩反应的关系。5．分析骨骼肌单收缩的3个时期。6．了解骨骼肌收缩的总和现象，观察不同频率的阈上刺激引起肌肉收缩形式的改变。[基本原理]蛙类的一些基本生命活动和生理功能与恒温动物相似，若将蛙的神经-肌肉标本放在任氏液中，其兴奋性在几个小时内可保持不变。若给神经或肌肉一次适宜刺激，可在神经和肌肉上产生一个动作电位，肉眼可看到肌肉收缩和舒张一次，表明神经和肌肉产生了一次兴奋。在生理学实验中常利用蛙的坐骨神经-腓肠肌标本研究神经、肌肉的兴奋、兴奋性；刺激与反应的规律和肌肉收缩的特征等，制备坐骨神经腓肠肌标本是生理学实验的一项基本操作技术。腓肠肌由许多肌纤维组成，刺激腓肠肌时，不同的刺激强度会引起肌肉的不向反应。当刺激强度过小时，不引起肌肉发生收缩反应．此时的刺激为阈下刺激。当全部肌纤维同时收缩时，则出现最大的收缩反应。这时，即使再增大刺激强度，肌肉收缩的力量也不再随之加大。可以引起肌肉发生最大收缩反应的最小刺激强度为最适刺激强度。肌组织对于一个阈上强度的刺激，发生—次迅速的收缩反应，称为单收缩。单收缩的过程可分为3个时期：潜伏期、收缩期和舒张期。两个同等强度的阈上刺激，相继作用于神经—肌肉标本，如果刺激间隔大于单收缩的时程、肌肉则出现两个分离的单收缩；如果刺激间隔小于单收缩的时程而大于不应期，则出现两个收缩反应的重叠，称为收缩的总和：当同等强度的连续阈上刺激作用于标本时，则山现多个收缩反应的叠加，此为强直收缩。当后一收缩发小在前一收缩的舒张期时，称为不完全强宜收缩；后一收缩发生在前一收缩的收缩期时，各自的收缩则先全融合，肌肉出现持续的收缩状态，此为完全强直收缩。[动物与器材]蛙或蟾蜍、常用手术器械(手术剪、手术镊、手术刀、金冠剪、眼科剪、眼科镊、毁髓针和玻璃分针)、蜡盘、蛙板(木质或硬泡沫塑料)、玻璃板、同定针、锌铜弓、培养皿或不锈钢盘、污物缸、滴管、纱布、粒棉线、任氏液。计算机采集系统、张力传感器(100g)、保护刺激电极、支架、双凹夹、肌槽。[实验方法与步骤]一、神经－肌肉标本的制备1．破坏脑、脊髓取蟾蜍一只，用自来水冲洗干净（勿用手搓）。左手握住蟾蜍，使其背部向上，用大拇指或食指使头前俯(以头颅后缘稍稍拱起为宜)。右手持探针由头颅后缘的枕骨大孔处垂直刺入椎管（图5.1-1）。然后将探针改向前刺入颅腔内，左右搅动探针2～3次，捣毁脑组织。如果探针在颅腔内，应有碰及颅底骨的感觉。再将探针退回至枕骨大孔，使针尖转向尾端，捻动探针使其刺入椎管，捣毁脊髓。此时应注意将脊柱保持平直。针进入椎管的感觉是，进针时有一定的阻力，而且随着进针蟾蜍出现下肢僵直或尿失禁现象。若脑和脊髓破坏完全，蟾蜍下颌呼吸运动消失,四肢完全松软，失去一切反射活动。此时可将探针反向捻动，退出椎管。如蟾蜍仍有反射活动，表示脑和脊髓破坏不彻底，应重新破坏。2．剪除躯干上部、皮肤及内脏用左手捏住蟾蜍的脊柱，右手持粗剪刀在前肢腋窝处连同皮肤、腹肌、脊柱一并剪断，然后左手握住蟾蜍的后肢，紧靠脊柱两侧将腹壁及内脏剪去(注意避开坐骨神经),并剪去肛门周围的皮肤，留下脊柱和后肢。3．剥皮一只手捏住脊柱的断端（注意不要捏住脊柱两侧的神经），另一只手捏住其皮肤的边缘,向下剥去全部后肢的皮肤（图5.1-2）。将标本放在干净的任氏液中。将手及使用过的探针、剪刀全部冲洗干净。4．分离两腿用鑷子取出标本,左手捏住脊柱断端,使标本背面朝上，右手用粗剪刀剪去突出的骶骨（也可不进行此步）。然后将脊柱腹侧向上，左手的两个手指捏住脊柱断端的横突，另一手指将两后肢担起，形成一个平面。此时用粗剪刀沿正中线将脊柱盆骨分为两半(注意，勿伤坐骨神经)。将一半后肢标本置于盛有任氏液中备...
