穆利斯 ( K.B.Mullis )荣获 1993 年诺贝尔化学奖 PCR 是穆利斯一个人的功劳吗？PCR 全称：聚合酶链式反应Why do PCRHow to PCRWhat is PCRWhy do PCR转基因技术犯罪鉴定亲子鉴定Why do PCRWhy do PCR古生物学肿瘤诊断Why do PCR2015 年 9 月， MIT Technology Review 杂志发布了“ 2015 年度十大突破技术（ Breakthrough Technologies2015 ）”，与肿瘤个性化医疗密切相关的“液体活检（ Liquid Biopsy ）”名列其中。 知识回顾What is PCR1. 变性（ 90℃-95℃）双链 DNA 模板在热作用下， _____ 断裂，形成 ________氢键单链 DNA2. 复性 (55℃-65℃)温度降低， 与DNA 模板结合，形成局部 ______ 。 双链引物3. 延伸（ 70℃-75℃ ）在 的作用下，连接 ，合 成与模板互补的 DNA链。 脱氧核苷酸Taq 酶 PCR 过程DNA 模板引物（一对 , 单链的 DNA 或 RNA ）Taq 酶（热稳定性 DNA 聚合酶）4 种游离的 dNTP PCR 条件What is PCR 拓展思考第几次会出现目标 DNA ？What is PCR1 移液 （在 0.5mlPCR 管内配置 20ul 反应体系）2 混合 （盖严，用手指轻轻弹击管壁）3 离心 （将微量离心管放在离心机上） PCR 的实验操作How to PCR (1) 94℃(1) 94℃ 预变性预变性 5min5min ，，(2) 94℃(2) 94℃ 变性变性 30s30s ， ， (3) 52 ℃(3) 52 ℃ 退火退火 30s30s ，， (4) 72 ℃(4) 72 ℃ 延伸延伸 1min1min 。。 (5) (5) 重复重复 (2)-(4)30(2)-(4)30 次次（（ 66 ）） 72 ℃72 ℃ 延伸延伸 1min1min 。。4 反应 将离心管放入 PCR 仪上，设置好 PCR 仪的循环程序How to PCR 拓展思考 1 操作过程中如何防止污染？ 2 如果没有 PCR 仪，提供 3 个恒温水浴锅和计时器， 你能成功进行体外 DNA 扩增么？How to PCRHow to PCRDNA 的检测 可以通过测量 DNA 含量来评价扩增的效果， DNA 在 260nm 的紫外线波段有一强烈的吸收峰，峰值的大小与 DNA 的含量有关DNA 含量测定紫外分光光度计（ 1 ）稀释2 Lµ PCR 反应液，加入 98 Lµ 蒸馏水，将样品进行 50 倍稀释（ 2 ）对照调零以蒸馏水作为空白对照，在波长 260nm 处，将紫外分光光度计的读数调节至零取 DNA 稀释液 100 Lµ 至比色杯中，测定 260nm 处的光吸收值（ 3 ）测定DNA 含量（ g/mL ）＝ 50×(26...
