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叶酸代谢能力基因检测操作流程VIP免费

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MTHFR C677T , MTHFR A1298C, MTRR A66G基因检测操作流程实验流程一、操作步骤适用仪器: 普通 PCR仪样本要求: EDTA抗凝剂的静脉全血( 100μ l ),室温保存不超过 7 天, 2 ~8℃保存不超过1 个月,- 20℃保存不超过 3 个月,反复冻融次数不超过5 次;DNA的浓度应不低于5ng/ μ l , A260/ A 280应在~之间。有血块的样本需经匀浆处理或用组织研磨仪研磨处理后再进行全血DNA的提取。检验方法:(试剂盒中的检本测卡、阳性/ 阴性对照卡上标识解释如下:M表示突变型, WT表示野生型, C表示质控线, T 表示检测线。)A: 样本 DNA的制备试剂盒准备工作:1、清洗液 BW-I:用 50 ml 量筒分别移取35 ml 无水乙醇(分析纯)和35 ml 异丙醇加入至清洗液 BW-I 试剂瓶中,颠倒混合均匀,在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期,备用。2、清洗液 BW-II :用 50 ml 量筒移取 49 ml 无水乙醇加入至清洗液BW-II 试剂瓶中,颠倒混合均匀,在试剂瓶上标明“已加入醇”和日期,备用。3、蛋白酶 K 准备:取出蛋白酶K,室温解冻,涡旋混匀后备用。4、磁性微粒准备:将磁性微粒涡旋混匀,保证均一。实验操作步骤:1.将 20 μ l 蛋白酶 K 溶液加入 2 ml 离心管的管底。依次加入100 μ l 全血、 200 μ l 裂解液BL,用涡旋振荡器混合15 sec( 以下简称涡旋混匀 ) ,56 ℃水浴 20 min 。2.向步骤 1 裂解处理的样品中依次加入300 μ l 结合液 BI、25 μ l 的磁性微粒 (移取前必须充分涡旋混匀),涡旋混匀,室温静置5 min 。磁性分离 5 min ,弃上清。3.从磁性分离器上取出离心管, 加入 400 μ l 清洗液 BW-I,涡旋混匀,磁性分离至上清澄清 (期间上下颠倒数次,以清洗离心管管壁) ,弃上清;重复本步操作,以400μ l 清洗液 BW-I 重复清洗一次。4.从磁性分离器上取出离心管, 加入 400 μ l 清洗液 BW-II ,涡旋混匀,磁性分离至上清澄清 (期间上下颠倒数次,以清洗离心管管壁) ,弃上清(尽可能弃去所有的清洗液BW-II )。5.打开离心管盖,将其室温晾干5 min 。6.从磁性分离器上取下离心管,向管中加入100 μ l 洗脱液 ES,涡旋混匀, 56℃水浴 5 min 。7.将离心管置于磁性分离器上,磁性分离至上清澄清。将上清液(分离纯化得到的DNA溶液)转移到 2 ml 离心管中,直接用于下游实验或于-20 ℃保存备用。B:PCR扩增液准备(1)每...

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