第十八章血细胞分离技术Separationtechniqueofthebloodcell)一、原理在体外进行细胞免疫检测时，首先必须进行淋巴细胞的分离。分离淋巴细胞的方法很多，但不管采用哪种方法，均要求分离的淋巴细胞纯度高、产量多，而且不丧失活性，同时也要求分离技术简单、操作方便。外周血液中红细胞和白细胞的比例在几百甚至上千比一，两类细胞的大小和密度不同，其沉降速度也就不同。红细胞的自然沉降率较快，加入高分子量的聚合物，如明胶、右旋糖酐等还可以加速其凝聚。利用自然沉降法、密度梯度离心法或二者结合，可以将淋巴细胞从血液中分离出来。这种分离出的淋巴细胞一般包括单核细胞。除去单核细胞，可以利用单核细胞的吸附功能，如铁颗粒、玻璃面或尼龙网等，除去（或分离）单核细胞，从而提纯淋巴细胞。二、采血（一）材料与试剂1．抗凝剂（1）肝素：肝素是含硫酸基的粘多糖，常用其钠盐或钾盐，它能阻止凝血酶原转化为凝血酶，进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白，从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为 1OOOU/ml,市售肝素多为 1OOU〜126U/mg。（2）乙二胺四乙酸（EDTA）：是一种螯合剂。用生理盐水配制成 4%的溶液备用。（3）阿氏液（Alsever 液），配方如下:枸橼酸钠(Na3C6H5O7・5H2O)O.8Og枸橼酸O.O325g葡萄糖2.O5g氯化钠O.42gH2O 加至1OO.OOml混匀溶解后，114.3°C 高压蒸汽灭菌 lOmin 备用。阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂，又含有细胞生存的营养，所以它既可做抗凝剂，又可做血细胞的保存液。2．针头根据不同动物和采血部位，采用不同型号的针头，用前必须灭菌或消毒。3．采血容器注射器或三角瓶等。4．采血动物。（二）操作方法1．采血法各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血，猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血，家禽由翼下静脉或心脏采血，兔由心脏或耳静脉采血，犬由颈静脉或四肢静脉采血，豚鼠由心脏采血，小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。2．抗凝采集血液最关键的问题是抗凝，采用什么方法进行抗凝，则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下:（1）肝素抗凝：采血时，使每 ml 血液含 15U〜20U 肝素即可。计算采集的血液量，按 1OOOU/ml 的量加入肝素，直接放入采血容器中，采血时，边采血边轻轻摇动，使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血，可直接用注射器抽取一定量的肝素液，再采血直接抗凝。（2）EDTA 抗凝：采血前，用灭菌生理盐水将 EDTA 配制成 4％溶液，然...
