第一章基因工程基因工程是狭义的遗传工程，遗传工程的核心 是构建重组 DNA分子 。基因工程 也称为 “重组 DNA技术”。第一节 工具酶的发现和基因工程的诞生基因工程的理论基础 ：DNA是遗传物质， DNA的双螺旋结构，以及遗传信息的传递方式。基因工程的技术保障： 限制性核酸内切酶， DNA连接酶和质粒载体发现与应用。一、限制性核酸内切酶： 能够识别和切割 DNA分子内一小段特殊核苷酸序列的酶。 （平末端和黏性末端）限制性核酸内切酶可作为切割DNA分子的手术刀，它的发现和应用，使DNA重组成为可能。二、DNA连接酶： 将具有末端碱基互补的2 个 DNA片段连接在一起，形成的DNA分子称为重组 DNA分子。 DNA连接酶具有缝合DNA片段的作用。三、质粒： 能够自主复制的双链环状DNA分子，它们在细菌中以独立于大型DNA分子之外的方式存在，是一种特殊的遗传物质。最常用的是大肠杆菌的质粒，其含有抗生素抗性基因。标志基因工程诞生的试验：通过重组，使大肠杆菌同时具有四环素和卡那霉素的抗性。四、基因工程的载体载体是运载外源DNA进入宿主细胞的车子，即运载工具。除质粒外，基因工程载体还有 入噬菌体、植物病毒和动物病毒。入噬菌体： 将外源基因载入大肠杆菌等宿主细胞。植物病毒： 将外源基因带入植物细胞。动物病毒： 将外源基因带入动物细胞。第二节 基因工程的原理和技术基因工程的 基本原理 是让人们感趣的基因（目的基因）在宿主细胞中稳定和高效表达。基因工程的 基本要素 ：工具酶、目的基因、载体和宿主细胞。基因工程的 基本操作步骤： A目的基因的获得； B重组 DNA的形成； C重组 DNA导入受体细胞（宿主细胞） ；D筛选含有目的基因的受体细胞；E目的基因的表达。一、获得目的基因目的基因序列已知： 化学合成方法合成目的基因，PCR扩增目的基因。目的基因序列未知： 构建基因文库。二、形成重组 DNA分子用相同 的限制性核酸内切酶分别切割 目的基因和载体，两者形成相同的黏性末端，然后用 DNA连接酶将目的基因和载体连接在一起，形成重组DNA分子。三、将重组 DNA分子导入受体细胞受体细胞 ：大肠杆菌，枯草杆菌，酵母菌和动植物细胞等。质粒做载体 ：受体细胞应该选择大肠杆菌，用氯化钙处理大肠杆菌，增加其细胞壁的通透性，使含有目的基因的重组质粒进入大肠杆菌宿主细胞。四、筛选含有目的基因的宿主细胞载体上含有 抗性基因 ，含有重组质粒的受体细胞可以在抗性培养基中生长。五、...
