完整版DPPH自由基清除测定VIP专享VIP免费

DPPH法测定黄芩黄酮的抗氧化活性抗氧化就是任何以低浓度存在就能有效抑制自由基的氧化反应的物质，其作用机理可以是直接作用在自由基，或是间接消耗掉容易生成自由基的物质，防止发生进一步反应。目前对自由基清除剂的研究方法主要有2 类，一类是体外模型，另一类是体内模型，其中 DPPH 法是体外模型中最常用的方法。DPPH 又称 1,1- 二苯基 -2- 三硝基苯肼， 是一种很稳定的氮中心的自由基，他的稳定性主要来自共振稳定作用的3 个苯环的空间障碍， 使夹在中间的氮原子上不成对的电子不能发挥其应有的电子成对作用。它的无水乙醇溶液呈紫色，在517nm 波长处有最大吸收，吸光度与浓度呈线性关系。 。向其中加入自由基清除剂时，可以结合或替代DPPH· ，使自由基数量减少，吸光度变小，溶液颜色变浅，借此可评价清除自由基的能力。即通过在517nm 波长处检测样品清除DPPH· 的效果，来计算抗氧化能力。实验研究表明， 黄芩黄酮中清除DPPH 自由基活性的主要成分是黄芩苷[1] ，黄芩苷中含有羧羟基和酚羟基能与DPPH 反应，反应式如下：NN+O2NO2NNO 2H+NNHO2NO2NNO 2DPPH 与抗氧化剂反应原理材料：DPPH（1,1- 二苯基 -2- 三硝基苯肼）；无水乙醇；仪器：分光光度计1.DPPH贮备液的制备准确称取 DPPH 试剂 3．5mg ，用无水乙醇溶解，并定量转入10mL 容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度， 取 2mL 至 100ml 容量瓶中，摇匀得浓度为0.0178mmol ／L DPPH 贮备液，置于冰箱中冷藏备用。2. 试液的制备 ( 只作参考 )准确称取 5.2mg 干燥的黄酮提取物（32.75%）, 用无水乙醇溶解， 并定量转入50ml 容量瓶中，用无水乙醇定量至刻度，取10ml 至 100ml 容量瓶中，摇匀得浓度为0.0233mmol ／L试液。3.DPPH· 清除率的测定在 10mL 比色管中依次加入4.0mLDPPH 溶液和黄酮提取液，再加入无水乙醇至刻度，混匀立即用1cm 比色皿在 517nm 波长处测吸光值(A) ，吸光值记为Ai，再在温室避光保存30min 后测吸光值，记为Aj，对照试验为只加DPPH 的乙醇溶液，其吸光值记为Ac。按下式计算自由基清除率(K) ：K(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]*100% 试验重复三次，取其平均值作为最后结果。[1]. 刘玉萍 ,Purusotam Basnet, 小松かっ子 ,曹晖 .黄芩清除自由基活性与黄芩苷含量的相关性研究 [J]. 中国中药杂志 ,2002,27(8):575-579 药品： DPPH（1,1- 二苯基 -2- 三硝基苯肼）；推荐厂家：上海如吉生物科技发展有限公司；...