专题１基因工程1.1 DNA 重组技术的基本工具１．基因工程又叫DNA重组技术 ，是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外 DNA重组和转基因 等技术，赋予生物以新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。操作水平是 DNA分子水平 ，操作环境是在 体外 。２．“分子手术刀”── 限制性核酸内切 酶。这类酶主要是从 原核生物 中分离纯化出来的。迄今已从近300 种微生物中分离出了约4000 种限制酶。能够识别双链 DNA分子的某种 特定核苷酸序列 ；切开两个 两个核苷酸 之间的 磷酸二酯键，形成 黏性末端 或平末端。３．“分子缝合针”── DNA连接酶。将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键 。种类： 1）E.coli DNA连接酶：只能将双链 DNA片段互补的 粘性 末端之间连接起来2）T4 DNA连接酶：既可以“缝合”双链 DNA片段互补的 粘性 末端，又可以“缝合”双链 DNA片段的 平末端，但连接平末端之间的效率比较低４．“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体。作为载体的必要条件：能自我复制 、有切割位点 、有遗传标记基因 等。载体的种类： 细菌质粒 、λ 噬菌体的衍生物 、动植物病毒1.2 基因工程的基本操作程序１．基因工程的基本操作步骤主要包括：目的基因的获取 ；基因表达载体的构建 ；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定 。２. 目的基因的获取方法： 从基因文库中获取 、利用 PCR提取目的基因 、人工合成法 。3.PCR是一项 在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成 技术。原理 DNA双链复制 。条件： 模板 DNA；RNA引物 ；四种脱氧核苷酸 ；热稳定 DNA聚合酶（ Taq酶）。方法： DNA受热 变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列 结合、DNA聚合酶作用下 延伸合成 互补链。4．基因表达载体的功能：使目的基因在受体细胞中稳定存在 ；可以 遗传给下一代；使目的基因能够表达和发挥作用。5．基因表达的载体的组成目的基因 + 启动子 + 终止子 + 标记基因6．转化：目的基因进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定 和表达的过程。7. 导入植物细胞： 农杆菌转化 法（表达载体导入农杆菌， 再让农杆菌感染植物细胞）这是双子叶植物和裸子植物中常用的基因转化方法；基因枪 法，这是单子叶植物中常用的基因转化方法； 花粉管通道 法，这种方法十分简便经济， 我国的转基因抗虫棉就是...
