专题１基因工程1
1 DNA 重组技术的基本工具１．基因工程又叫DNA重组技术 ，是指按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外 DNA重组和转基因 等技术，赋予生物以新的遗传特性， 从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品
操作水平是 DNA分子水平 ，操作环境是在 体外
２．“分子手术刀”── 限制性核酸内切 酶
这类酶主要是从 原核生物 中分离纯化出来的
迄今已从近300 种微生物中分离出了约4000 种限制酶
能够识别双链 DNA分子的某种 特定核苷酸序列 ；切开两个 两个核苷酸 之间的 磷酸二酯键，形成 黏性末端 或平末端
３．“分子缝合针”── DNA连接酶
将切下来的DNA片段拼接成新的DNA分子，恢复被限制酶切开的磷酸二酯键
种类： 1）E
coli DNA连接酶：只能将双链 DNA片段互补的 粘性 末端之间连接起来2）T4 DNA连接酶：既可以“缝合”双链 DNA片段互补的 粘性 末端，又可以“缝合”双链 DNA片段的 平末端，但连接平末端之间的效率比较低４．“分子运输车”──基因进入受体细胞的载体
作为载体的必要条件：能自我复制 、有切割位点 、有遗传标记基因 等
载体的种类： 细菌质粒 、λ 噬菌体的衍生物 、动植物病毒1
2 基因工程的基本操作程序１．基因工程的基本操作步骤主要包括：目的基因的获取 ；基因表达载体的构建 ；将目的基因导入受体细胞；目的基因的检测与鉴定
目的基因的获取方法： 从基因文库中获取 、利用 PCR提取目的基因 、人工合成法
PCR是一项 在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成 技术
原理 DNA双链复制
条件： 模板 DNA；RNA引物 ；四种脱氧核苷酸 ；热稳定 DNA聚合酶（ Taq酶）
方法： DNA受热 变性解旋为单链、冷却后RNA引物与单链相应互补序列 结合、DNA聚合酶作用下 延伸合成
