英文缩写英文缩写英文名称英文名称中文名称中文名称RFLPRFLPRestrictionfragmentlengthRestrictionfragmentlengthpolymorphismpolymorphism限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性STSSTSSequencetaggedsiteSequencetaggedsite序列标签位点序列标签位点RAPDRAPDRandomamplifiedpolymorphicRandomamplifiedpolymorphicDNADNA随机扩增多态性随机扩增多态性DNADNAAFLPAFLPAmplifiedfrangmentlengthAmplifiedfrangmentlengthPolymorphismPolymorphism扩增片断长度多态性扩增片断长度多态性SSRSSRSimplesequencerepeatSimplesequencerepeat简单序列重复简单序列重复SNPSNPSinglenucleotidepolymorphismSinglenucleotidepolymorphism单核苷酸多态性单核苷酸多态性植物遗传研究中几种主要的ＤＮＡ分子标记植物遗传研究中几种主要的ＤＮＡ分子标记1980年以来，RFLP；1984年以来，SSR；1990年以来，RAPD；1993年以来，AFLPDNA从哪里来？•方法：先提取总DNA(SDS法和CTAB法)•原理：在去污剂和适当温度条件下充分裂解细胞，并抑制DNA酶活性；经氯仿、苯酚等处理使蛋白质变性，离心后除去。溶液中的DNA经酒精或异丙醇沉淀。AgaroseGelElectrophoresis•DNA分子带负电，从琼脂糖凝胶的负极向正极泳动，速度依赖于其分子质量——小的紧密的DNA分子的较大伸展片断容易穿过琼脂糖介质。•试剂：电泳缓冲液（TAE或TBE）；电泳琼指糖；EB或SYBRGreen；指示剂（加样缓冲液）•仪器：电泳仪（直流电）；电泳槽AgaroseGelElectrophoresis12345678910111213141516PolyacrylamideGelElectrophoresisDNA片段的观察EB染色，紫外发光银染荧光同位素DNAVisualizationTechnique—SilverStaining电泳后，在醋酸中固定PAGE胶除去电泳液和凝胶中的尿素，并防制小片段扩散。换几次水除去固定剂。胶在硝酸银和甲醛中染色。在染色后，将凝胶用水清洗，在含甲醛和硫代硫酸钠的碱性碳酸钠溶液中显色。甲醛将与DNA结合的银离子还原为金属银。硫代硫酸钠防止自由银离子还原为金属银，否则会增加背景。DNASilverStainingFluorescenceStaining•EB、SYBRGreen、DAPE等IsotopeLabeling11Molecularmarker—Hybridizaton-basedmarks1.RFLP的中英文全称2.RFLP的基本原理及优缺点3.RFLP的主要仪器及基本操作全称：RestrictionFragmentLengthPolymorphismbyBotstein(1980)基本原理：物种的基因组DNA在限制性内切酶作用下，产生相当多的大小不等的片段，用放射性同位素标记的DNA作探针，把与被标记DNA相关的片段检测出来，从而得到多态性标记RFLP（限制性片段长度多态性）PrincipleforRFLPsSameprincipleforDNA/DNA,DNA/RNA,orRNA/RNAProceduresforRFLPs•高质量DNA提取•DNA酶切、电泳、转膜、固定•探针制备、标记•预杂交、杂交•洗膜、压片、显影•膜再生ProceduresforRFLPs•限制性酶切：取10—15微克DNA，加入约5U于最适温度下保温12—18小时。ProcessesforRFLPManipulation•转膜•探针标记•杂交•洗膜•放射自显影ProcessesforRFLPManipulationExampleofRFLPinCitrus•ByChengetal,2003.(PublishedinPMBR)TypeofpminRFLPMarkersRFLP标记的优缺点•优点：共显性，非常稳定，是目前公认的最可靠的标记方法•缺点：数量少，多态性位点不够；DNA纯度要求高、用量大；检测步骤多、周期长；费时、费钱；用作探针的DNA克隆制备、保存不方便；同位素有放射性
