中华人民共和国国家标准GB5413.5—2010中华人民共和国国家标准GB5413.5—2010食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定食品安全国家标准婴幼儿食品和乳品中乳糖、蔗糖的测定第一法高效液相色谱法第二法莱因―埃农氏法试样经除去蛋白质后，在加热条件下，以次甲基蓝为指示剂，直接滴定已标定过的费林氏液，根据样液消耗的体积，计算乳糖含量。将一定量的碱性酒石酸铜甲、乙液等量混合，立即生成天蓝色的氢氧化铜沉淀；这种沉淀很快与酒石酸钾反应，生成深蓝色的可溶性酒石酸钾钠铜络合物。在加热条件下，以次甲基蓝作为指示剂，用样液滴定，样液中的还原糖与酒石酸钾钠铜反应，生成红色的氧化亚铜沉淀；这种沉淀与亚铁氰化钾络合成可溶的无色络合物；二价铜全部被还原后，稍过量的还原糖把次甲基蓝还原，溶液由兰色变为无色，即为滴定终点；根据样液消耗量可计算出还原糖含量。1.乙酸铅溶液（200g/L）：2.草酸钾—磷酸氢二钠溶液：3.费林氏液甲液：4.费林氏液乙液：5.次甲基蓝溶液（10g/L）天平：感量为0.1mg。烘箱：温度可控制在±2℃。1.费林氏液的标定用乳糖标定称取预先在94℃±2℃烘箱中干燥2h的乳糖标样约0.75g（精确到0.1mg），用水溶解并定容至250mL。将此乳糖溶液注入一个50mL滴定管中，待滴定。预滴定精确滴定吸取10mL费林氏液(甲、乙液各5mL)于250mL三角烧瓶中。加入20mL蒸馏水，放入几粒玻璃珠，从滴定管中放出15mL样液于三角瓶，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲基蓝溶液，继续滴入至溶液蓝色完全褪尽为止，读取所用样液的体积。另取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，放入几粒玻璃珠，加入比预滴定量少0.5mL～1.0mL的样液，置于电炉上，使其在2min内沸腾，维持沸腾状态2min，加入3滴次甲基蓝溶液，以每两秒一滴的速度徐徐滴入，溶液蓝色完全褪尽即为终点，记录消耗的体积。计算费林氏液的乳糖校正值mVmVA42501000ALmVf4式中：A--实测乳糖数，单位为毫克（mg）；V--滴定时消耗乳糖溶液的体积，单位为毫升（mL）；M--称取乳糖的质量，单位为克（g）；f--费林氏液的乳糖校正值；AL--由乳糖液滴定毫升数查表1所得的乳糖数，单位为毫克（mg）。1称取婴儿食品或脱脂粉2g，全脂加糖粉或全脂粉2.5g，乳清粉1g，精确到0.1mg，用100mL水分数次溶解并洗入250mL容量瓶中。徐徐加入4mL乙酸铅溶液、4mL草酸钾—磷酸氢二钠溶液，并振荡容量瓶，用水稀释至刻度。静置数分钟，用干燥滤纸过滤，弃去最初25mL滤液后，所得滤液作滴定用。预滴定：吸取10mL费林氏液(甲、乙液各5mL)于250mL三角烧瓶中。加入20mL蒸馏水，放入几粒玻璃珠，从滴定管中放出15mL样液于三角瓶，置于电炉上加热，使其在2min内沸腾，保持沸腾状态15s，加入3滴次甲基蓝溶液，继续滴入至溶液蓝色完全褪尽为止，读取所用样液的体积。精确滴定：另取10mL费林氏液（甲、乙液各5mL）于250mL三角烧瓶中，再加入20mL蒸馏水，放入几粒玻璃珠，加入比预滴定量少0.5mL～1.0mL的样液，置于电炉上，使其在2min内沸腾，维持沸腾状态2min，加入3滴次甲基蓝溶液，以每两秒一滴的速度徐徐滴入，溶液蓝色完全褪尽即为终点，记录消耗的体积。试样中乳糖的含量mVfFX110025.0式中：X--试样中乳糖的质量分数，单位为克每百克（g/100g）；f--由消耗样液的毫升数查表1所得乳糖数，单位为毫克（mg）；F--费林氏液乳糖校正值；V1--滴定消耗滤样品液量，单位为毫升（mL）；m--试样的质量，单位为克（g）。1、在样品处理时，不能用铜盐作为澄清剂，以免样液中引入Cu2+，得到错误的结果。2、碱性酒石酸铜甲液和乙液应分别贮存，用时才混合，否则酒石酸钾钠铜络合物长期在碱性条件下会慢慢分解析出氧化亚铜沉淀，使试剂有效浓度降低。3、滴定必须在沸腾条件下进行，其原因一是可以加快还原糖与Cu2+的反应速度；二是次甲基蓝变色反应是可逆的，还原型次甲基蓝遇空气中氧时又会被氧化为氧化型。此外，氧化亚铜也极不稳定，易被空气中氧所氧化。保持反应液沸腾可防止空气进入，避免次甲基蓝和氧化亚铜被氧化而增加耗糖量。4.滴定时不能随意摇...
