实验一实验一ABOABO血型血型鉴定和鉴定和RhRh血型鉴定血型鉴定临床检验诊断学实验室实验内实验内容容实验内实验内容容一、一、5%5%红细胞悬液的配制红细胞悬液的配制二、二、ABOABO血型鉴定（试管法、纸片血型鉴定（试管法、纸片法）法）三、三、RhRh血型鉴定血型鉴定??一、一、5%5%红细胞悬液的配制红细胞悬液的配制原理：原理：使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释使用一定量的稀释液（生理盐水）稀释压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，压积红细胞，遵循抗原抗体结合的量比关系，获出最佳结果。获出最佳结果。器材器材::小试管小试管（玻璃及塑料皆可）（玻璃及塑料皆可）、加样枪、、加样枪、试管架、离心机、记号笔、显微镜。试管架、离心机、记号笔、显微镜。试剂试剂::生理盐水。生理盐水。标本标本::抗凝或非抗凝静脉血。抗凝或非抗凝静脉血。操作操作11、全血、全血2ml2ml1000g1000g离心离心55minmin，吸取分离上清至另一干净，吸取分离上清至另一干净试管（备用）；试管（备用）；22、压积加生理盐水约、压积加生理盐水约22～～3ml3ml，充分摇匀或吸管轻轻吹，充分摇匀或吸管轻轻吹打混匀，再次离心去掉上清液；打混匀，再次离心去掉上清液；33、重复离心（、重复离心（1000g1000g，，60s60s）洗涤红细胞）洗涤红细胞33次，去掉上次，去掉上清液制备压积红细胞；清液制备压积红细胞；44、取、取11滴压积红细胞于滴压积红细胞于11支干净的小试管中，在其中加支干净的小试管中，在其中加入入1919滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是滴生理盐水，用小吸管轻轻吹打混匀，就是5%5%的的红细胞悬液。红细胞悬液。目的：目的：掌握ABO正反定型的原理、方法。原理：原理：红细胞凝集试验，通过正、反定型鉴定ABO血型。正定型：用已知血型特异性抗体（抗-A、抗-B）来测定红细胞上有无相应的抗原；反定型：用已知血型试剂红细胞测定血清中有无相应的抗体。二、二、ABOABO鉴定鉴定器材器材::记号笔、小玻璃试管、滴管、试管架、离心机、鉴定纸板、显微镜。试剂试剂::1.ABO血型抗体：抗A、抗B(-A、-B)；2．试剂红细胞：3％～5％Ac、Bc及Oc。3.生理盐水。标本标本::抗凝或非抗凝静脉血。操作操作（试管法）（试管法）(1)标记试管：正定型：取洁净小试管2支，分别标明－A、－B；反定型：取3支小试管，标记Ac、Bc、Oc。(2)配5%悬浮红细胞：取静脉血2滴于小试管中，加2ml生理盐水，混匀，1000g离心60s，弃上清；重复3次。取管底1滴压积加19滴生理盐水，即为5%悬红。(3)加样：正定型管中分别加入1滴试剂和1滴悬红，反定型管中分别加入2滴血清和1滴试剂红细胞。（4）离心：1000g离心15秒。(5)结果：轻摇试管,观察有无凝集或溶血现象无凝集或溶血现象。4+4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。3+3+红细胞凝集成大小块，血清清晰。红细胞凝集成大小块，血清清晰。2+2+红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。红细胞凝块分散成许多小块，血清清晰。l+l+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞。±±镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞。红细胞。mfmf混合凝集外观（混合凝集外观（mixedfieldmixedfield）指镜下可见少数红细）指镜下可见少数红细胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。胞凝集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。－－表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。红细胞凝集强度判断标准红细胞凝集强度判断标准试管法结果判定表lABO血型正反定型结果判断标准判断标准操作：玻片法操作：玻片法((鉴定纸板鉴定纸板))(1)洁净玻片(鉴定纸板)一张。标-A、-B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B试剂1滴，再加受检者10％红细胞悬液l滴，混匀。(2)另取洁净玻片(或鉴定纸板)一张。标Ac、Bc、Oc，各加受检血清2滴，再分别滴加Ac、Bc、Oc悬红1滴。(3)室温轻转动玻片(或鉴定纸板)，使血清与细胞充分混匀，约2min肉眼观察凝集(溶血)反应。玻片试验时可用低倍镜观察结果。玻片试验时可用低倍镜观察结果。正...
