蛋白质亚基分子量测定 SDS-PAGE 凝胶电泳 一 目的 掌握 SDS-PAGE 凝胶电泳测定蛋白质亚基分子量的基本原理和操作方法 二 原理 SDS 是一种阴离子去污剂，作为变性剂和助溶性试剂，能断裂分子内和分子间的氢键，使分子去折叠，破坏蛋白质分子的二级、三级结构；而强还原剂，如二硫苏糖醇、β -巯基乙醇能使半胱氨酸残基之间的二硫键断裂
因此，在样品和凝胶中加入 SDS 和还原剂后，蛋白质分子被解聚为组成它们的多肽链，解聚后的氨基酸侧链与 SDS 结合后，形成带负电的蛋白质-SDS 胶束，所带电荷远远超过了蛋白质原有的电荷量，消除了不同分子间的电荷差异；同时，蛋白质-SDS 聚合体的形状也基本相同，这就消除了在电泳过程中分子形状对迁移率的影响
基于上述SDS-PAGE 的原理介绍，我们可以利用SDS-PAGE 电泳进行未知蛋白质的分子量测定；以不同分子量的标准蛋白进行SDS-PAGE 电泳得到不同标准蛋白的电泳迁移率，制作标准校正曲线，然后对未知蛋白在相同条件下进行SDS-PAGE 电泳，测定迁移率，从标准曲线得到相应的分子量 三 试剂和器材 试剂：1 低分子量标准蛋白质 2 待测蛋白质样品（用上次测定的可溶性蛋白样液） 3 凝胶贮液：30g 丙烯酰胺，0
8g 甲叉双丙烯酰胺，溶于100ml 蒸馏水中，过滤，于4°暗处贮存，一个月内使用 4 1mol/l，PH8
8 Tris-HCl 缓冲液，Tris121g 溶于蒸馏水，用浓盐酸调至 PH8
8，以蒸馏水定容至 1000ml 5 10%(w /v)SDS 6 10%(w /v)过硫酸铵溶液（当天配） 7 四甲基乙二胺（TEMED） 8 电极缓冲液PH8
3：Tris30
3g，甘氨酸 144
2g，SDS 10g， 溶于蒸馏水并定容至 1000ml,使用时稀释 10 倍
9 2×样品稀释液： SDS 500mg
